[发明专利]一种猪伪狂犬病毒的检测方法在审
| 申请号： | 201510697228.5 | 申请日： | 2015-10-22 |
| 公开（公告）号： | CN105348372A | 公开（公告）日： | 2016-02-24 |
| 发明（设计）人： | 李明义;孙伟;刘杉杉;刘阳;李晓林;冯晶晶;李彦凤;葛栋;李佳棋;张伦;常娓娓 | 申请（专利权）人： | 山东信得科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/03 | 分类号： | C07K14/03;C07K16/08;C12N15/38;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266100 山东省青岛*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 狂犬病毒 检测 方法 | ||
1.一种gE蛋白，其特征在于，所述的gE蛋白的氨基酸序列为SEQIDNO:1。
2.编码权利要求1所述的gE蛋白的基因，其特征在于，所述的基因的核苷酸序列为SEQIDNO:2。
3.权利要求1所述的gE蛋白作为抗原的应用。
4.一种抗体，其特征在于，所述的抗体是携带有权利要求1所述的gE蛋白作为抗原制备的。
5.一种检测患病猪群抗体的阻断ELISA方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：
将gE蛋白抗原经过稀释液稀释，定量包被在ELISA96孔板中，4℃过夜；
用PBST洗涤液对未结合的抗原进行清洗；
分别将阴性血清、阳性血清和待检血清加到相应的检测孔中，轻微震动，使反应板中的液体混匀；
将微量反应板密封后置于37℃孵育；
垂直倒掉反应板中的液体，并用洗涤液进行对每个孔进行清洗；
用封闭液对反应板进行封闭，置于37℃孵育；
去除反应板中的液体，并用洗涤液进行对每个孔进行清洗；
将稀释好的酶标单抗加入到每个反应孔中，置于37℃孵育；
倒掉反应板中的液体，并用洗涤液进行对每个孔进行清洗；
添加底物，置于37℃中反应；
加入终止液，终止反应，并于酶标仪读取450nm吸光度值，样品值/阴性值大于2判定为阳性，小于1为阴性。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的阴性血清为未经免疫小鼠的血清。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的阳性血清是将PRV病毒经灭活后免疫小鼠的分离血清。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的封闭液为5％脱脂奶粉。
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的洗涤液为含0.5‰吐温-20的PBS溶液。
10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的的酶标单抗，是将权利要求4所述的抗体用辣根过氧化物酶进行酶标制备的。
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