[发明专利]从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法在审

专利信息
申请号: 201510691424.1 申请日: 2015-10-23
公开(公告)号: CN105238771A 公开(公告)日: 2016-01-13
发明(设计)人: 张昭 申请(专利权)人: 张昭
主分类号: C12N9/72 分类号: C12N9/72;C07K14/81
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 050000 河北*** 国省代码: 河北;13
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摘要:
搜索关键词: 尿液 提取 尿激酶 方法
【权利要求书】:

1.一种从尿液中提取尿激酶和乌司他丁的方法,其特征在于,包括:

收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间;

在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌,使尿液中的尿激酶蛋白被硅胶吸附;

通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间;

在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌,使尿液中的乌司他丁蛋白被甲壳素吸附;

从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液;

将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶,在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:收集尿液并调节其PH值至6.0-6.5之间,具体包括:

利用免冲水小便器和管道收集尿液;

用盐酸调节尿液的PH值至6.3。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:在尿液中加入粉末状硅胶并搅拌,具体包括:以每吨尿液中加入20-25公斤硅胶的比例,将硅胶与尿液混合在一起并搅拌。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于:通过过滤方式获取尿液中的硅胶并调节过滤后的尿液的PH值至5.3-5.7之间,具体包括:

用纱布口袋过滤所述尿液,并收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶,采用分次注入盐酸的方式将过滤后的尿液的PH值调节至5.5。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:在前述过滤后的尿液中加入甲壳素并搅拌,具体包括:

以每吨尿液中加入5公斤甲壳素的比例,将甲壳素与尿液混合在一起并搅拌,并分次加入盐酸和消泡剂,使尿液PH值保持在5.5。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:从前述硅胶和甲壳素上分别获取尿激酶蛋白液和乌司他丁蛋白液,具体包括:

用纱布口袋收集吸附有尿激酶蛋白的硅胶,并对硅胶进行层析处理得到含有尿激酶蛋白的层析液,再对层析液进行洗脱处理得到尿激酶蛋白液;

用纱布口袋收集吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素,将甲壳素用清水浸洗,并对甲壳素进行洗脱处理,得到乌司他丁蛋白液。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:对硅胶进行层析处理,具体包括:

将硅胶注入层析柱内,用清水洗涤硅胶,再按硅胶和清洗液的比例不低于1:8的配比用清洗液清洗,得到含有尿激酶蛋白的层析液,所述清洗液按每50公斤水加入82克磷酸二氢钠调配并加入氨水调制PH值至8.9±0.1。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:对层析液进行洗脱处理,具体包括:

按1升硅胶配3升洗脱液的比例,用洗脱液对层析液中的尿激酶蛋白进行洗脱收集,得到尿激酶蛋白液,所述洗脱液按每50公斤水加入3.5公斤氯化铵调配并加入氨水调制PH值至10.0-11.0。

9.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:对甲壳素进行洗脱处理,具体包括:

将吸附有乌司他丁蛋白的甲壳素放入洗脱液中搅拌,释放出被吸附的乌司他丁蛋白,所述洗脱液由二次饱和水与水按1:2的比例混合而成,并加入片碱调制PH值至9.0-10.0。

10.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:

将尿激酶蛋白液加入到饱和水中提取得到尿激酶,具体包括:按1升尿激酶蛋白液配2升饱和水的比例,将所述尿激酶蛋白液加入到饱和水中,经至少10小时静置后,采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取尿激酶;

在乌司他丁蛋白液中加入硫酸铵提取得到乌司他丁,具体包括:将释放出乌司他丁蛋白的液体中加入工业用硫酸铵并搅拌均匀,且比重保持在26-28之间,经至少5小时静置后,采用含浸湿硅藻土的真空漏斗过滤提取乌司他丁。

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