[发明专利]一种一型极化树突状细胞及其诱导方法和应用

权利要求书

1.一种体外诱导一型极化树突状细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，制备NK细胞的培养基上清：K562细胞与NK细胞按1:2至1:10比例共培养并加入IFNalpha，24-48小时后收集培养基上清；

步骤2，分离外周血中的单核细胞，细胞短暂贴壁培养之后，移除悬浮细胞，加入诱导剂GM-CSF和IL-4进行培养，培养第3天，第5天更换一半量的培养基，获得成熟DC细胞；

步骤3，所述步骤2中制得的成熟DC细胞用含INFγ以及所述步骤1中的NK细胞的培养基上清进一步培养诱导两天，使所述的成熟DC细胞分化为DC1细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1中制备NK细胞的培养基上清时，首先分离脐血/外周血单个核细胞，加入NK细胞诱导试剂，培养12-15天收集NK细胞；然后将收集的NK细胞接种至培养基中，并在培养基中加入激活因子IFNα并与K562细胞共培养24-48小时，最后收集培养基上清，于-80℃保存或直接使用。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，NK细胞与K562细胞的共培养的接种比例1：5至1：20。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的K562细胞可由K562-NK细胞替换。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中所述的贴壁培养是指在含IL-2扩增培养基中加入10％血浆，置于37.0℃、饱和湿度、5％CO₂环境条件下的培养。

6.一种如权利要求1-5任意一项所述方法制备的一型极化树突状细胞。

7.一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于，由如权利要求1-5任意一项所述方法获得的DC1细胞进行肿瘤抗原肽负载而得到。

8.一种制备肿瘤抗原特异性CTL细胞的方法，其特征在于，包括以下操作：分离外周血中的单核细胞，细胞在培养瓶中短暂培养之后，悬浮细胞转移新培养瓶，按细胞密度1.0～3.0×10⁶个/ml添加扩增培养基，至第五天加入诱导剂IFN-γ培养24小时，然后加入诱导试剂IL-1α及CD3并与权利要求7所述的负载了抗原肽的DC1细胞混合培养；混合培养后第二次添加扩增培养基时，进行第二次抗原肽负载；培养15-20天，收集细胞。

9.如权利要求8所述的方法制备的肿瘤抗原特异性CTL细胞在制备抗癌药物中的应用。