[发明专利]活动性结核病诊断分子的筛选与应用

说明书

本发明提供了活动性结核病诊断分子的筛选与应用。具体地，本发明公开了结核分枝杆菌重要抗原的高通量筛选及其在活动性结核病诊断中的应用。本发明人基于GST融合表达的高通量功能蛋白筛选技术，筛选到92个能被结核病病人血清识别的阳性抗原，其中14个抗原呈现强阳性反应。活动性性结核血清学检测表明，用这些阳性抗原检测活动性结核病具有较高的敏感性和特异性。将其中的TBGP1、TBGP2、TBGP3、TBGP4、TBGP5和TBGP6这6个蛋白组成的抗原组合，用作结核病血清学检测，经实验室验证表明，该组合检测结核分枝杆菌具有较高敏感性和特异性，在结核病诊断和监测中具有应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地，本发明涉及活动性结核病诊断分子的筛选与应用。

背景技术

结核病(Tuberculosis)是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium TuberculosisComplex)感染引起的、以呼吸系统感染为主的传染性疾病。由于卡介苗(BCG)的发明和有效治疗结核病药物的广泛使用，结核病一度得到有效控制。

自上个世纪90年代以来，由于全球化带来的人口大规模流动、抗生素的滥用，加之人们对结核病防范意识的松懈，结核病死灰复燃，卷土重来，成为严重威胁人类健康的重要传染性疾病。WHO等国际组织在本世纪初制定了以遏制结核病流行的千年发展目标计划，虽然一定程度上减少了结核病的新发病率和死亡率，但成效并不显著，结核病没有完全得到消除，全球结核病的防控形势依然严峻。据估计，全球有近1/3人口感染结核分枝杆菌，约有2000万结核病人，每年有860万新发病例，至少130万人死于该病。目前全球结核病负担最重的国家主要集中在亚洲和非洲，我国在22个结核病高负担国家中结核患者人数居世界第二。

事实上，由于耐多药结核菌株、广泛耐药结核菌株等的出现，HIV/AIDS在结核病流行区域的传播，以及传统结核病疫苗卡介苗(BCG)的免疫保护作用降低，结核问题变得更加复杂。

缺少有效的结核感染诊断方法是结核病难以根除的一个重要原因。传统的结核病诊断方法有很多不足，痰涂片镜检检出率低，痰结核菌培养费时费力，影像学检查作为辅助手段无法精确识别微小病灶等。近年来发展的结核诊断技术有PCR扩增技术、快速痰培养、以及新型影像学等，但是这些技术在发展中国家受到费用限制，并且不适合大规模监视和筛查。

TST是应用最广的结核感染检测手段，但是其敏感性低，且易受卡介苗(BCG)接种影响，与其他分枝杆菌存在交叉感染等。IGRAs通过检测机体内结核分枝杆菌特异性抗原刺激后引起的γ干扰素释放诊断结核感染情况。与TST相比，IGRAs由于使用RD(region ofdifference)区缺失基因编码的抗原，如CFP-10，ESAT-6和TB7.7等，在卡介苗广泛接种地区具有较高的特异性，但是其敏感性仍有待提高，特别是在免疫抑制人群中会出现较多无法判定的结果。此外，TST和IGRAs两者均不能区分活动性结核和潜伏性结核，这使得其在结核病高流行地区的临床应用中受到极大地限制。

因此，本领域迫切需要开发更准确有效的结核感染诊断方法和工具。

发明内容

本发明的目的就是提供准确有效的结核感染诊断方法和工具。

在本发明的第一方面，提供了一种结核阳性抗原组合(或抗原集)，所述的抗原组合包括n种活动性结核抗原，其中，n为5-100的正整数，并且所述的活动性结核抗原选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.:1-92中任一所示的多肽；

(b)序列如SEQ ID NO.:1-92中任一所示的多肽与GST的融合蛋白；

(c)由(a)中2-10个(较佳地3-7个)多肽融合形成的融合多肽；

(d)上述(a)、(b)和(c)的任意组合。