[发明专利]一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法，尤其是涉及一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法。

背景技术

海马又叫水马、海狗子、马头鱼、龙落子等，为介类硬骨鱼，在分类上属于鱼纲、海龙目、海龙科、海马属的海产鱼类。海马种类较多，分布较广，目前已知的有35种。一般多分布于热带、亚热带的近陆浅海海藻、海草生长丰富的海域中。分布于我国沿海附近的常见海马有：三斑海马（HippocampustrimaculatusLeach）、大海马（H.kudaBleeker）、日本海马（H.japonicusKaup）、刺海马（H.histrixKaup）和线纹海马（H.kelloggiJordanetSnyder）。在中国，海马是一种名贵的中药材，有很多功效，被人们称为“南方人参”。据《本草纲目》记录，海马具“主难产及血气痛，暖水脏，壮阳道，消瘕块，治疗疮肿痛”等功效。在我国海马的药用价值历史悠久，梁代陶弘景在《本草经集注》中已有海马药用的记载，而欧洲18世纪开始也将海马入药。目前海马在医药上的主要功能有：用于阳痿、不育、哮喘、虚烦不眠、腰腿痛、铁打损伤、外伤出血、腹痛、难产、乳腺癌、瘤块等。

据测定，海马中蛋白质含量占海马干重的67.9-73.56%，各类氨基酸含量比较均衡，对海马蛋白进行酶解制备生物活性肽具有重要的意义。生物活性肽是蛋白质中20个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。活性肽在自然界中是广泛存在的，没有肽，就没有活性，就没有生命。现代营养学研究发现：人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以低肽形式消化吸收的，以游离氨基酸形式吸收的比例很小；进一步试验揭示肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多，表明肽的生物效价和营养价值比游离氨基酸更高。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。由于生物活性肽具有这些特殊的功能，使得人们对活性肽的需求量急剧增加，目前，已有许多活性肽应用在保健和医疗上。

血管紧张素转化酶抑制肽是一类具有抑制血管紧张素转化酶（ACE）活性的多肽物质。这类多肽由于其有降血压的功能，所以又称为降血压肽。血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）根据来源可分为天然和人工合成两大类，目前临床上使用的ACEI都是人工合成的。这类药物的作用机理是作为竞争性抑制剂与ACE结合，从而扰乱血管紧张素II的生成。人工合成类高血压药物对人体会产生一定的负作用，如咳嗽、皮肤瘙痒、味觉紊乱及血压过度降低等。因此，天然血管紧张素转化酶抑制肽是今后研究与发展趋势之一。海洋拥有特殊的生态环境，赋予了海洋生物异于陆生生物所特有的化学成分和结构，具有特异的高活性、高药效。近年来对海洋药物的研究越发深入，越来越多的研究发现生物活性肽具有很好的医疗保健功效，具有抗肿瘤、抗氧化、降血压、抗疲劳、增强免疫力等活性。而海马是重要的中药材，因此利用海马蛋白来开发ACE抑制肽具有重要的药用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺简单、操作方便且本法制备多肽水解度高，多肽片段分子量较小、活性高的海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

（1）海马前处理：将海马洗净冻好后，于-80℃下冷冻干燥48h，再用粉碎机粉碎，然后采用CO₂超临界流体萃取技术脱除脂肪酸，得到脱脂海马粉；

（2）海马蛋白液制备：将步骤（1）得到的脱脂海马粉与水按40-60g/L的比例混合后，依次用胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶解后，用滤纸过滤取上清液，即为海马蛋白酶解液；将海马蛋白酶解液用截留分子量为20KDa的超滤膜进行超滤，收集分子量大于20KDa的滤液，并进行浓缩和冷冻干燥得到海马蛋白粉；

（3）ACE抑制肽制备：将步骤（2）中得到的海马蛋白粉与水按400-600g/L的比例混合后，加入海马蛋白粉质量5%的木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为59℃，时间为7.5h，pH为7.7，将酶解液沸水灭活10分钟后，于4000rpm离心10min，取沉淀冷冻干燥即得到海马ACE抑制肽粉末；