[发明专利]焦磷酸测序法检测CYP3A5基因分型的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外核酸检测技术领域，尤其涉及一种焦磷酸测序法检测CYP3A5基因分型的引物对及试剂盒。

背景技术

CYP3A是CYP超家族中在肝脏和肠道表达最为丰富的酶，可占到整个CYP酶系的30％-70％。CYP3A广泛分布于人体胃肠道、胎盘、子宫、肾等组织中。在人体内的CYP3A有CYP3A4、CYP3A5、CYP3A7及CYP3A3共4种亚型。CYP3A的四个成员串联排列在7q22.1上长约231kb的基因座内。其各成员在发育模式、分布特征、含量及活性等方面有所不同。但氨基酸序列相似度高达75％-88％，而且在底物谱、催化反应及转录调控等方面相互重叠。CYP3A5只在10％-20％的成人中存在，细胞色素P450酶系3A亚家族参与约60％的处方药物代谢，而其主要成员CYP3A4和CYP3A5则共同参与约50％的临床用药的代谢。

CYP3A5位于人类7号染色体q21.1-22.1，基因全长为31.8kb，有13个外显子，编码502个氨基酸，它的表达及活性有着很大的个体和种族差异，在成年人中，只有约10％-20％的少数人表达较多的CYP3A5，在这些人群中，CYP3A5可占肝脏总CYP3A酶含量的50％以上，因此CYP3A5的表达是决定个体间药物疗效和个体间药物毒性差异的最重要因素。

CYP3A5活性的差异主要由单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)造成。迄今为止，已从人群中筛查出26个CYP3A5基因变异，多数频率较低，且无显著的功能改变。其中，最为重要的是3号内含子的由腺嘌呤(A)突变为鸟嘌呤(G)的单碱基突变(CYP3A5*3)。CYP3A5*3产生数种剪接变异体mRNA，使终止密码子提前，导致CYP3A5缺乏。CYP3A5*3/*3基因型(GG基因型)不表达CYP3A5，只有CYP3A5*1/*3基因型(AG基因型)或CYP3A5*1/*1基因型(AA基因型)才能产生高水平mRNA，进而表达CYP3A5。即，只有至少含有一个CYP3A5*1时才能表达高水平CYP3A5。

CYP3A5*3是中国人群最常见的SNP，在中国汉族、维吾尔族及哈萨克族的发生频率分别为72.7％，84.8％和86.6％，而高加索人群为91.7％。

CYP3A5活性的改变可以改变以其为底物的药物的药代动力学。近年来，关于CYP3A5*3(6986A/G)多态性和药物血药浓度、疗效的相关性研究成为热点。研究发现，服用西罗莫司的肾移植患者中，基因型为CYP3A5*1/*1或CYP3A5*1/*3的患者需要更大的日剂量才能达到和基因型为CYP3A5*3/*3的患者一样的西罗莫司稳态血药浓度。研究报道，携带CYP3A5*1的患者较CYP3A5*3纯合子患者有更高的他克莫司清除率。此外，国内最近一项研究表明，与携带CYP3A5*1等位基因AA患者相比，CYP3A5*3/*3基因型患者口服较低剂量环孢菌素A就能达到相当的服药后2h血药浓度水平。以往的研究还证明，CYP3A5的基因型对氨氯地平、沙奎那韦、阿普唑仑的代谢有影响；但同为CYP3A底物的咪达唑仑、硝苯地平、地尔硫卓、氯吡格雷的代谢不受CYP3A5基因型的影响。

CYP3A5*3多态性是唯一对肾移植受体他克莫司(FK506)起始用量具有明确指导意义的基因多态性。体外研究显示，在他克莫司代谢过程中，CYP3A5是较CYP3A4更为有效的酶，对他克莫司代谢的贡献率达60％，催化效率是CYP3A4的1.64倍。以CYP3A5基因型作为免疫抑制剂个体化治疗的依据，有助于确定他克莫司用药的初始剂量，变被动的监测为主动的预测，能有效降低移植术后急性排斥反应(AR)的发生率和药物的毒性及不良反应，进一步提高移植器官的存活率。

综上所述，对患者进行CYP3A5基因分型检测，具有极其重要的临床意义。检测CYP3A5酶对药物代谢速率的快、慢，合理调整药物剂量，提高临床治疗中药物疗效及降低毒副反应发生概率；指导临床正确使用环孢霉素及他克莫司等药物，减少用药无效的情况。