[发明专利]焦磷酸测序法检测CYP2C9基因分型的引物对及试剂盒

权利要求书

1.一种焦磷酸测序法检测CYP2C9基因分型的引物对，其特征 在于，所述CYP2C9基因检测的多态性位点为CYP2C9*2和/或 CYP2C9*3，所述引物对包括：

(1)对于CYP2C9*2等位基因，

扩增引物为：

CYP2C9*2正向扩增引物：5’-GACGCTGCGGAATTTTGG-3’；

CYP2C9*2反向扩增引物：

5’-CAGTAAGGTCAGTGATATGGAGTAGGG-3’；

CYP2C9*2测序引物：5’-GGCTTCCTCTTGAACA-3’；

其中，所述CYP2C9*2正向扩增引物的5’端进行生物素标记；

(2)对于CYP2C9*3等位基因，

扩增引物为：

CYP2C9*3正向扩增引物：5’-AGCCACATGCCCTACACAG-3’；

CYP2C9*3反向扩增引物：5’-CAGGCTGGTGGGGAGAAG-3’；

CYP2C9*3测序引物：5’-GCACGAGGTCCAGAGA-3’；

其中，所述CYP2C9*3反向扩增引物的5’端进行生物素标记。

2.一种焦磷酸测序法检测CYP2C9基因分型的试剂盒，其特征 在于，所述CYP2C9基因检测的多态性位点为CYP2C9*2和/或 CYP2C9*3，所述试剂盒包括：

(1)对于CYP2C9*2等位基因，

CYP2C9*2正向扩增引物：5’-GACGCTGCGGAATTTTGG-3’；

PCR反应液1，所述PCR反应液1含有CYP2C9*2反向扩增引 物：5’-CAGTAAGGTCAGTGATATGGAGTAGGG-3’；

CYP2C9*2测序引物：5’-GGCTTCCTCTTGAACA-3’；

其中，所述CYP2C9*2正向扩增引物的5’端进行生物素标记；

(2)对于CYP2C9*3等位基因，

CYP2C9*3反向扩增引物：5’-CAGGCTGGTGGGGAGAAG-3’；

PCR反应液2，所述PCR反应液2含有CYP2C9*3正向扩增引 物：5’-AGCCACATGCCCTACACAG-3’；

CYP2C9*3测序引物：5’-GCACGAGGTCCAGAGA-3’；

其中，所述CYP2C9*3反向扩增引物的5’端进行生物素标记。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还 包括：

CYP2C9*2阳性对照品1，其为插有SEQIDNO.8所示核苷酸序 列的CYP2C9*2野生纯合子质粒；

CYP2C9*2阳性对照品2，其为所述CYP2C9*2野生纯合子质粒 与插有SEQIDNO.9所示核苷酸序列的CYP2C9*2突变纯合子质粒 组成的质粒混合物；

CYP2C*3阳性对照品1，其为插有SEQIDNO.10所示核苷酸序 列的CYP2C9*3野生纯合子质粒；

CYP2C*3阳性对照品2，其为所述CYP2C9*3野生纯合子质粒 与插有SEQIDNO.11所示核苷酸序列的CYP2C9*3突变纯合子质粒 组成的质粒混合物；

其中，质粒载体为pMD18-T质粒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述CYP2C9*2 阳性对照品2中所述CYP2C9*2突变纯合子质粒和所述CYP2C9*2 野生纯合子质粒的数量比为1:1；所述CYP2C9*3阳性对照品2中所 述CYP2C9*3突变纯合子质粒和所述CYP2C9*3野生纯合子质粒的 数量比为1:1。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还 包括：质控品和空白对照品，所述质控品的序列为：TAYGGTTTGCA。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述空白对照 品为水。

7.权利要求1所述的引物对在制备用于检测CYP2C9基因分型 的试剂中的应用。

8.权利要求2所述的试剂盒在制备用于检测CYP2C9基因分型 的试剂中的应用。