[发明专利]一种源自酪蛋白的抗氧化肽及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物活性肽技术领域，尤其涉及一种源自酪蛋白的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物及其制备方法。

背景技术

低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein，简称LDL)是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒，可被氧化成氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)，当低密度脂蛋白，尤其是经氧化修饰的低密度脂蛋白过量时，它携带的胆固醇便会积存在动脉壁上，从而引起动脉粥样硬化。因此，通过补充额外的抗氧化剂来抑制LDL的氧化是一种非常可行的预防动脉粥样硬化的方法。人工合成的抗氧化剂虽然高效、廉价，但由于有副作用，人们更青睐于选择天然的抗氧化剂。例如抗氧化肽，由于其以预防疾病、保护健康的良好功效以及蛋白来源丰富和其自身的安全性而备受瞩目。

抗氧化肽，是来源于蛋白质的一类具有清除自由基、供氢/供电子、螯合金属离子、淬灭单线态氧、分解过氧化物、抑制脂肪氧合酶活力和抑制脂质过氧化等功效的活性肽。酪蛋白是牛乳中的主要蛋白质，约占80％。酪蛋白不仅是优质的乳源蛋白，更是多种重要生物活性肽的良好来源。但是这些生物活性肽经口服到达血液循环前，会受到一系列的阻碍，如胃中的低酸环境和胃蛋白酶，以及肠道中碱性环境和胰蛋白酶、肽酶等，这些因素都会影响抗氧化肽的吸收从而影响其在生物体内的生理活性。抗氧化肽进入血液循环到达靶点是其发挥功能的前提条件。因此，要想利用来自牛奶酪蛋白的抗氧化肽来预防动脉粥样硬化的发生，不仅需要这些肽具有较好的抑制LDL氧化的能力，还需要其能够耐受胃肠道的消化和吸收。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术之不足，提供一种源自酪蛋白富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物，该抗氧化肽混合物不仅具有抑制低密度脂蛋白氧化功能，而且能够耐受胃肠道的吸收和消化而不被降解，因此，其适于应用于保健食品和预防动脉粥样硬化的药物领域中。

本发明所要解决的技术问题在于克服上述现有技术之不足，提供一种源自酪蛋白富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法。

本发明提供的一种源自酪蛋白富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的技术方案为：该抗氧化肽混合物为KEMPFPK、RGPFPIIV、VYPFPGPIHN、TEDELQDKIHP、KAVPYPQRDMPIQ、VYPFPGPIHNSLPQ、QPHQPLPPTVMFPPQ、HQPHQPLPPTVMFPPQ、MHQPHQPLPPTVMFPPQ、KNQDKTEIPT、HQPHQPLPPT、MHQPHQPLPPT、HQPHQPLPPTVM、NLHLPLPL、LHLPLPL和MPFPK氨基酸序列中的至少一种。

本发明提供一种源自酪蛋白富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法采用的主要技术方案为，其包括以下步骤：

a、将酪蛋白浸泡于水中，制得酪蛋白样品溶液，以便加酶进行水解；

b、向步骤a中所制得的酪蛋白样品液中加入蛋白酶进行水解，水解结束后进行酶的钝化，制得富含抗氧化肽的水解液；

c、将步骤b中制得的水解液的pH采用0.5-1M盐酸溶液将其调节至6.5～7.0，然后对其进行真空浓缩，得到浓缩液；

d、将步骤c中得到的酪蛋白水解物浓缩液采用离子交换柱层析设备进行分离纯化，得到富含碱性氨基酸的肽组分，即为具有显著抑制低密度脂蛋白氧化的高活性抗氧化性的抗氧化肽；

e、将步骤d中得到的抗氧化肽进行冷冻干燥或喷雾干燥，得到富含碱性氨基酸的酪蛋白抗氧化肽干粉。

本发明提供的一种源自酪蛋白富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法还采用如下附属技术方案：

步骤a中酪蛋白样品液的制备方法为将酪蛋白浸泡于pH为2.0～8.0的水中，然后在30～60℃的水浴中预热10～15min，目的是使酪蛋白样品液达到蛋白酶的最佳酶解条件；其中，所述酪蛋白与水的比例为1g∶10～20mL。

步骤a中，所述水优选为纯净水、去离子水或蒸馏水；所述酪蛋白优先选用牛奶、羊奶的酪蛋白提取物。

步骤b中，所述蛋白酶与所述酪蛋白的质量比为1∶20～100。

步骤b中所述蛋白酶为胃蛋白酶、胰液素、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶。

步骤b中酶的钝化方法为将所述富含抗氧化肽的水解液加热至85～100℃，并维持10～20min，即完成酶的钝化过程，同时也起到杀灭微生物的作用。