[发明专利]一种源自酪蛋白的抗氧化肽及应用

权利要求书

1.一种源自酪蛋白的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物，其特征在于：该抗氧化肽混合物为KEMPFPK、RGPFPIIV、VYPFPGPIHN、TEDELQDKIHP、KAVPYPQRDMPIQ、VYPFPGPIHNSLPQ、QPHQPLPPTVMFPPQ、HQPHQPLPPTVMFPPQ、MHQPHQPLPPTVMFPPQ、KNQDKTEIPT、HQPHQPLPPT、MHQPHQPLPPT、HQPHQPLPPTVM、NLHLPLPL、LHLPLPL和MPFPK氨基酸序列中的至少一种。

2.如权利要求1所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、将酪蛋白浸泡于水中，制得酪蛋白样品溶液；

b、向步骤a中所制得的酪蛋白样品液中加入蛋白酶进行水解，水解结束后进行酶的钝化处理，制得富含抗氧化肽的水解液；

c、将步骤b中制得的水解液的pH采用0.5-1M盐酸溶液将其调节至6.5～7.0，然后对其进行真空浓缩，得到浓缩液；

d、将步骤c中得到的酪蛋白水解物浓缩液采用离子交换柱层析设备进行分离纯化，得到富含碱性氨基酸的肽组分，即为具有显著抑制低密度脂蛋白氧化的高活性抗氧化性的抗氧化肽；

e、将步骤d中得到的抗氧化肽进行冷冻干燥或喷雾干燥，得到富含碱性氨基酸的酪蛋白抗氧化肽干粉。

3.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于：步骤a中酪蛋白样品液的制备方法为将酪蛋白浸泡于pH为2.0～8.0的水中，然后在30～60℃的水浴中预热10～15min；其中，所述酪蛋白与水的比例为1g∶10～20mL。

4.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于：步骤b中，所述蛋白酶与所述酪蛋白的质量比为1∶20～100。

5.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于：步骤b中所述蛋白酶为胃蛋白酶、胰液素、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶。

6.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于：步骤b中酶的钝化方法为将所述富含抗氧化肽的水解液加热至85～100℃，并维持10～20min，即完成酶的钝化过程，同时也起到杀灭微生物的作用。

7.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤(c)所述酪蛋白水解液真空浓缩的温度为40～60℃。

8.如权利要求2所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，步骤d中酪蛋白抗氧化肽的分离纯化方法，采用离子交换色谱柱法。包括以下步骤：

(I)采用缓冲液平衡柱子2～3体积，其中，柱层析填料为SPSephadexC-25或DEAE-SephadexA-25离子交换树脂填料；

(II)将酪蛋白水解物溶于所述缓冲液，使其浓度为100～500mg/mL，然后用0.45μm的水系滤膜过滤；

(III)取一定量滤液加到离子交换柱填料上方，在0.5～5mL/min的流速下进行分离，收集富含碱性氨基酸的抗氧化肽组分。

9.如权利要求8所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于：步骤(III)中，离子交换柱洗脱程序前半部分的洗脱液为缓冲液；后半部分洗脱液为缓冲液+0.5～1M的氯化钠。

10.如权利要求8所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，将步骤(III)中收集的富含碱性氨基酸的抗氧化肽组分，进行如下后处理：采用0.5～1.5M的氢氧化钠溶液将收集组分的pH调节为6.5～7.0，将调节pH后的收集组分真空浓缩至干物质含量为15～40％，接着用填料为SephadexG15柱层析或D-SaltExcellulosePlasticDesalting柱进行脱盐处理，然后对脱盐后的抗氧化肽溶液进行真空浓缩，将所述浓缩液进行喷雾或冷冻干燥，得到富含碱性氨基酸的酪蛋白抗氧化肽。

11.如权利要求1所述的富含碱性氨基酸的抗氧化肽混合物在保健食品和预防动脉粥样硬化的药物领域中的应用。