[发明专利]一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及多糖的制备技术领域，具体为一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖(cCVPs)的制备方法。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。高血糖则是由于胰岛素分泌缺陷或其生物作用受损，或两者兼有引起。糖尿病时长期存在的高血糖，导致各种组织，特别是眼、肾、心脏、血管、神经的慢性损害、功能障碍。根据世界卫生组织在2014年公布的数据，全球糖尿病患者人数已经达到3.47亿。

具有药用价值的食用真菌在传统民间药物中被认为是非常重要的治疗药物之一，并且应用非常普遍。研究表明，食用真菌对疾病的治疗主要是由于它所含有生物活性物质所引起的。这些食用真菌的活性物质可以使糖尿病患者的肝脏、胰腺等脏器功能恢复正常，从而促进胰岛素和相关激素的分泌，使得机体的代谢功能恢复。

多糖具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病等药用活性，将多糖羧甲基化之后显著增加多糖的生物活性，并且还会增加多糖的水溶性和粘稠性，在食品、药剂配方、工业原料中被广泛使用。而现阶段多糖羧甲基化的方法普遍存在：羧甲基化多糖取代度较低，并且在增加试剂浓度和反应时间时，又会严重影响羧甲基化多糖的得率。目前并没有利用梭柄松苞菇多糖进行羧甲基化的研究，值得注意的是梭柄松苞菇多糖的分子量较其他菌类多糖而言较小，而分子量的大小往往与取代度和生物活性成反比，因此用羧甲基化的梭柄松苞菇多糖应用于抗糖尿病的研究必将会为多糖的化学修饰和多糖的生物活性提供新思路和参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以梭柄松苞菇为代表的高效的食用菌多糖羧甲基化的方法，，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法，其特征在于：(1)取新鲜梭柄松苞菇进行预处理；(2)梭柄松苞菇多糖的制备，具体为：水提取：先用乙醇进行洗涤，然后离心处理，将离心管的沉淀样品干燥，并按料液比1∶20与蒸馏水混合，然后进行超声波处理，超声波作用功率为150W，每工作15min，暂停5min，提取温度80℃，提取时间2.5h，上述水提取步骤重复提取三次，合并提取液即为梭柄松苞菇多糖提取液；乙醇沉淀：将梭柄松苞菇多糖提取液用旋转蒸发仪浓缩，加入5倍体积的95％乙醇溶液，搅拌0.5h后，置于4℃冰箱12h，再离心处理，然后弃上清液，收集沉淀，冻干待用；去除蛋白质：按固液比1∶10加入蒸馏水溶解梭柄松苞菇多糖，然后加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，充分振荡30min后，再离心处理，获得三层液体，吸取最下层多糖溶液，重复该去除蛋白质步骤5次；去除小分子物质：将去除蛋白质的多糖提物，流水透析过夜，透析袋的截留分子量为3000，以去除小分子杂质；再用旋转蒸发仪将该多糖提取液浓缩，与4倍体积的95％乙醇溶液混合，搅拌0.5h后，置于4℃冰箱12h，再离心处理，离心机转速5000rpm，时间5min，弃上清液，沉淀即为梭柄松苞菇多糖，冷冻干燥备用；(3)羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备，具体为：取分子量范围为5.0×10³-1.0×10⁴Da的250mg梭柄松苞菇多糖溶于10ml质量分数为20％的NaOH溶液中，充分搅拌混合液30min，加入3g氯乙酸和15ml的异丙醇的混合溶液，搅拌1h后，置于65℃的恒温箱中反应4h，待冷却至室温，用0.5M的HCl调pH至中性，流水透析过夜，透析袋的截留分子量为3000，与4倍体积的95％乙醇溶液混合，搅拌30min后，置于4℃冰箱12h，再离心，弃上清液，冷冻干燥即得到羧甲基化梭柄松苞菇多糖。

进一步的，新鲜梭柄松苞菇的预处理步骤具体为，

清洁：用塑料刮片将新鲜梭柄松苞菇表面的泥渍去除，不可用水清洗，不然表面的多糖会损失；

切块：将清洁后的新鲜梭柄松苞菇切块，每一个切块大小适中且均匀；

冷冻干燥：将梭柄松苞菇块放入冷冻干燥机，获得含水量低于5％的样品。

进一步的，乙醇沉淀步骤和去除蛋白质步骤中的离心处理的离心机转速5000rpm，时间5min。