[发明专利]一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法

权利要求书

1.一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法，其特征在于：

(1)取新鲜梭柄松苞菇进行预处理；

(2)梭柄松苞菇多糖的制备，具体为：

水提取：先用乙醇进行洗涤，然后离心处理，将离心管的沉淀样品干燥，并按料液比1∶20与蒸馏水混合，然后进行超声波处理，超声波作用功率为150W，每工作15min，暂停5min，提取温度80℃，提取时间2.5h，上述水提取步骤重复提取三次，合并提取液即为梭柄松苞菇多糖提取液；

乙醇沉淀：将梭柄松苞菇多糖提取液用旋转蒸发仪浓缩，加入5倍体积的95％乙醇溶液，搅拌0.5h后，置于4℃冰箱12h，再离心处理，然后弃上清液，收集沉淀，冻干待用；

去除蛋白质：按固液比1∶10加入蒸馏水溶解梭柄松苞菇多糖，然后加入1/4倍体积的氯仿-正丁醇，充分振荡30min后，再离心处理，获得三层液体，吸取最下层多糖溶液，重复该去除蛋白质步骤5次；

去除小分子物质：将去除蛋白质的多糖提物，流水透析过夜，透析袋的截留分子量为3000，以去除小分子杂质；再用旋转蒸发仪将该多糖提取液浓缩，与4倍体积的95％乙醇溶液混合，搅拌0.5h后，置于4℃冰箱12h，再离心处理，离心机转速5000rpm，时间5min，弃上清液，沉淀即为梭柄松苞菇多糖，冷冻干燥备用；

(3)羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备，具体为：

取分子量范围为5.0×10³-1.0×10⁴Da的250mg梭柄松苞菇多糖溶于10ml质量分数为20％的NaOH溶液中，充分搅拌混合液30min，加入3g氯乙酸和15ml的异丙醇的混合溶液，搅拌1h后，置于65℃的恒温箱中反应4h，待冷却至室温，用0.5M的HCl调pH至中性，流水透析过夜，透析袋的截留分子量为3000，与4倍体积的95％乙醇溶液混合，搅拌30min后，置于4℃冰箱12h，再离心，弃上清液，冷冻干燥即得到羧甲基化梭柄松苞菇多糖。

2.根据权利要求1所述的一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法，其特征在于：新鲜梭柄松苞菇的预处理步骤具体为，

清洁：用塑料刮片将新鲜梭柄松苞菇表面的泥渍去除，不可用水清洗，不然表面的多糖会损失；

切块：将清洁后的新鲜梭柄松苞菇切块，每一个切块大小适中且均匀；

冷冻干燥：将梭柄松苞菇块放入冷冻干燥机，获得含水量低于5％的样品。

3.根据权利要求1所述的一种羧甲基化梭柄松苞菇多糖的制备方法，其特征在于：乙醇沉淀步骤和去除蛋白质步骤中的离心处理的离心机转速5000rpm，时间5min。