[发明专利]一种猪伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种猪伪狂犬病病毒（PRV）近红外荧光检测试剂盒及其用途。

背景技术

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒（pseudor ra-biesvirus， PRV）引起的急性传染病。妊娠母猪表现为流产、死胎、木乃伊，尤其以产死胎较为严重某些省市表现为新生仔猪卜7日内发病，整窝死亡仔猪表现为体温升高、发抖、运动不协调、痉挛、呕吐、腹泻，出现划水运动、圆圈运动、体温下降死亡。该病对断奶仔猪也引起发病和死亡，还可以引起母猪不育症，屡配不孕该病在我国各地均有发生，给养猪业造成重大经济损先伪狂犬病毒属于疤疹病毒科，a疤疹病毒亚科，猪疤疹毒I型。与动物其它疤疹病毒一样，猪伪狂犬病毒具有长期潜伏感染、终生带毒的特性猪是该病毒的储藏者和传染源，在本病的传播上起着重要作用。目前控制和消灭伪狂犬病所面临的主要困难是伪狂犬病毒的潜伏感染问题，无论是自然感染猪还是试验感染猪，在初次感染康复后往往会建立起病毒的潜伏感染，此时并不向外界环境散发病毒，但在机体受到体内外因素的刺激时，病毒往往被活化，并由带毒动物传给其它动物，引起疾病暴发。

为了有效地控制该病，减少经济损失和将来最终根除和消灭此病，保证和促进养猪业的健康发展，开展伪狂犬病的简便、快速、特异性强、敏感性高并能检测潜伏感染的诊断方法研究是非常重要的。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的伪狂犬病病毒近红外荧光检测技术，解决现有技术中的问题。

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒及其用途。本发明所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血/血清/血浆中伪狂犬病病毒。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。

优选的，所述免疫荧光探针为抗伪狂犬病病毒单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。

硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体可以为相同的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体，也可以为不同的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体。

更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam ®Anti-PRV抗体[EP3737 （2） ] -C-terminal，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam ®Anti-PRV抗体[EPR3735]，或所述硝酸纤维素膜上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam通 Anti-PRV抗体[EPR3735]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗伪狂犬病病毒单克隆抗体为Abcam ®Anti-PRV抗体[EP3737（2）] -C-terminal。

更优选的，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。

近红外光（NIR），是介于可见光（VIS）和中红外光（MIR）之间的电磁波，ASTM定义NIR为波长在780nm-2526nm范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或荧光强度很小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大为减少。

本发明第二方面提供所述伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入 抗伪狂犬病病毒单克隆抗体；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液；

2）将含有抗伪狂犬病病毒单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；

3）将步骤1制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；

4）将步骤2所得的硝酸纤维素膜、步骤3所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成伪狂犬病病毒近红外荧光检测试剂盒。

优选的，所述步骤1中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠醚，制备获得探针溶液，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6，15-冠醚-5，18-冠醚-6中的一种或多种的组合；

更优选的，步骤1制备获得的探针溶液中冠醚的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。