[发明专利]检测氧化乐果的酶联免疫试剂盒及其应用在审
申请号: | 201510660485.1 | 申请日: | 2015-10-14 |
公开(公告)号: | CN106596945A | 公开(公告)日: | 2017-04-26 |
发明(设计)人: | 洪霞;刘静;张淑雅 | 申请(专利权)人: | 江苏维赛科技生物发展有限公司 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577 |
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地址: | 212009 江苏省镇*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 氧化 乐果 免疫 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种检测氧化乐果的酶联免疫检测试剂盒,其特征在于包括有:
(1)包被有氧化乐果偶联抗原的酶标板;
(2) 氧化乐果标准品溶液;
(3)浓缩酶结合物;
(4)酶结合物稀释液;
(5)底物显色液;
(6)终止液。
2.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于所述氧化乐果偶联抗原是由氧化乐果半抗原与载体蛋白偶联得到。
3.如权利要求2所述的试剂盒,其特征在于所述氧化乐果半抗原的制备方法主要
包括如下步骤:
1)取20 mg氧化乐果,10ul,1,3-丙二胺,催化量的4-二甲氨基吡啶溶解于2ml
N,N’-二甲基甲酰胺中,得到I液;
2)取20mg N,N’-二环己基碳二亚胺溶解于0.5mlDMF中,得到II液;
3)在0℃条件下,将II液缓慢滴加至I液中,恢复室温后,继续反应20 h;
4)蒸除溶剂,柱层析(洗脱液:二氯甲烷/甲醇,体积比20:1),得到氧化乐果半抗
原。
4.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于所述的浓缩酶结合物为酶标记的氧化乐果单克隆抗体。
5.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于所述浓缩酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶;酶结合物是采用过碘酸钠法将酶标记物与抗体偶联得到。
6.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于:所述的终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸
溶液,所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成,底物液A液为过氧化脲溶液,底物液B液为四甲基联苯胺溶液。
7.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于所用包被缓冲液为PH9.6,0.1mol/L碳酸盐缓冲液,所用封闭液为PH7.2~7.4,0.5%~1%牛血清白蛋白,0.1mol/L磷酸盐缓冲液,所述百分比为重量百分比。
8.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在于所述的酶结合物稀释液为PH7.2~7.4,含0.5%~1%牛血清白蛋白,0.1mol/L的磷酸盐缓冲液,所述百分比为重最百分比。
9.如权利要求l所述的试剂盒,其特征在r所述氧化乐果标准品溶液浓度分别为0ug/L、1ug/L、3ug/L、9ug/L、27ug/L、81ug/L。
10.一种检测样品中氧化乐果含量的方法,主要步骤包括:
1)将待测样品进行前处理;
2)用权利要求1—9任意一项所述的酶联免疫试剂盒进行检测;
3)分析检测结果。
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