[发明专利]生物条形码检测中的NP探针、其制备方法与生物条形码检测试剂盒

权利要求书

1.生物条形码检测中与NP探针联结的单链条形码DNA，其特征在于，所述条形码DNA长度少于90碱基至仍适用于荧光定量PCR/TaqMan荧光探针检测的长度，优选为60个碱基。

2.根据权利要求1所述的单链条形码DNA，其特征在于，其核苷酸序列如序列表中SEQIDNo：1所示。

3.一种生物条形码检测中的NP探针，其特征在于，其金纳米颗粒上包被有权利要求1或2所述的单链条形码DNA。

4.根据权利要求3所述生物条形码检测中的NP探针，其特征在于，金纳米颗粒上还包被有被检病原的多抗，所述被检病原的核酸序列与单链条形码DNA无同源性，例如为丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒。

5.一种生物条形码检测中NP探针的制备方法，包括以下步骤：

1)合成权利要求1或2所述的单链条形码DNA；

2)在金纳米颗粒上分别标记被检病原的多抗和所述单链条形码DNA；

3)用脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ)降解未标记上的游离单链条形码DNA；

得到NP探针。

6.根据权利要求5所述生物条形码检测中NP探针的制备方法，其特征在于，所述步骤3)的过程为：将1体积的DNaseⅠ(100U)、1体积的25mMMgCl₂、1体积的小牛血清和5体积的0.01MPBS混合均匀，加入2体积的步骤2)得到的标记有多抗和DNA的纳米金颗粒PBS重悬液中，37℃孵育2h，4℃、13000g离心10min，去除上清，0.01MPBS重悬沉淀得到去除了游离单链条形码DNA的NP探针，4℃保存。

7.一种生物条形码检测中MMP-核心抗原-NP三明治复合物，是将权利要求4所述NP探针、MMP探针和被检病原抗原通过抗原、抗体作用制备得到，所述MMP探针为标记有抗被检病原单抗的磁珠。

8.一种生物条形码检测试剂盒，包括权利要求3或4所述NP探针、标记有抗被检病原单抗的MMP探针以及用于实时荧光定量PCR检测的引物对和TaqMan荧光探针。

9.根据权利要求8所述生物条形码检测试剂盒，其特征在于，用于实时荧光定量PCR检测的引物对的上游引物的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo：2所示，下游引物的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo：3所示，TaqMan荧光探针的核苷酸序列如序列表中SEQIDNo：4所示。

10.根据权利要求8或9所述生物条形码检测试剂盒，其特征在于，所述被检病原为丙型肝炎病毒，其中包含：包被有抗丙型肝炎病毒核心抗原多抗和条形码DNA的NP探针、包被有抗丙型肝炎病毒核心抗原单抗的MMP探针以及用于实时荧光定量PCR检测的引物和TaqMan荧光探针，得到丙型肝炎病毒核心抗原生物条形码检测试剂盒。