[发明专利]盐酸万古霉素杂质11、13和15高纯度样品的制备方法

说明书

本发明公开了一种盐酸万古霉素杂质11、13和15高纯度样品的制备方法。取盐酸万古霉素结晶粉末配制成浓度为60～70g/L的盐酸万古霉素水溶液，调节pH 4～6，在水浴40～42℃下保温8～9小时，再回调pH至6～7；然后进行大孔树脂层析富集，分别收集纯度为40～60％的杂质11、杂质13和杂质15的粗品液体；粗品液体分别依次进行超滤和纳滤；纳滤液用高压液相色谱制备柱脱盐，得到杂质11、13和15的高纯度样品。该方法工艺简单，大大降低了制备成本。

技术领域

本发明属于生物发酵制药领域，涉及一种抗生素产品中的相关杂质的制备方法，尤其涉及盐酸万古霉素相关杂质11、13和15的高纯度样品的制备方法。

背景技术

盐酸万古霉素是三环糖苷化非核糖体肽的一种分支产物，由放线菌属的东方拟无枝酸菌(以前被命名为东方诺卡菌)通过发酵产生。盐酸万古霉素为窄谱抗生素，仅对革兰阳性菌有效，如溶血性链球菌、肺炎球菌及肠球菌等均属敏感，对耐药金葡菌本品尤为敏感。其作用机制是抑制细菌细胞壁的合成，它主要和细菌细胞壁结合，而使某些氨基酸不能进入细胞壁的糖肽中。临床主要用于耐青霉素金葡菌所引起的严重感染，如肺炎、心内膜炎及败血症等，对溶血性链球菌引起的感染及败血症等也有较好的疗效。

盐酸万古霉素相关杂质是盐酸万古霉素质量控制的重点，高纯度的杂质样品对其药理毒理研究有重要作用。

盐酸万古霉素的检测方式根据2010版中国药典规定，采用的高压液相色谱检测条件如下：

液相色谱仪：岛津LC-2010C HT

色谱柱：C₁₈250×4.6mm品牌：Thermo(赛默飞世尔)

流动相A：三乙胺缓冲液(取三乙胺4mL加水至2000mL，用磷酸调节pH值至3.2)∶乙腈∶四氢呋喃＝92∶7∶1

流动相B：三乙胺缓冲液∶乙腈∶四氢呋喃＝70∶29∶1

梯度设置：

检测波长：λ＝280 流速:1.0mL/min 进样体积:20μL

根据上述的检测方法，对盐酸万古霉素样品进行高压液相色谱检测，检测图谱如图1所示。分别对图1中的杂质进行编号命名，如下表1所示：

表1