[发明专利]盐酸万古霉素杂质11、13和15高纯度样品的制备方法

权利要求书

1.一种盐酸万古霉素杂质11、13和15高纯度样品的制备方法，包括以下步骤：

1)取盐酸万古霉素结晶粉末，配制成浓度为60～70g/L的盐酸万古霉素水溶液；

2)将步骤1)得到的盐酸万古霉素水溶液调节pH 4～6，在水浴40～42℃下保温8～9小时；

3)向步骤2)保温后的盐酸万古霉素水溶液中缓慢加入碱，回调pH至6～7；

4)对步骤3)回调pH后的盐酸万古霉素水溶液进行大孔树脂层析富集，分别收集纯度为40～60％的杂质11、杂质13和杂质15的粗品液体；

5)分别对杂质11、杂质13和杂质15的粗品液体依次进行超滤和纳滤；

6)步骤5)得到杂质11、杂质13和杂质15的纳滤液分别用高压液相色谱制备柱分离，得到杂质11、杂质13和杂质15的高纯度样品。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中盐酸万古霉素结晶粉末高压液相色谱检测为95～97％纯度。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中用浓度1％～2％的草酸溶液调节pH4～6。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)用1％～2％的碳酸氢钠溶液或氢氧化钠溶液回调pH。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4)采用的树脂为弱酸性离子交换树脂。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述弱酸性离子交换树脂为三菱化工的FPDA13或上海华震的HZPD-30树脂。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤4)树脂层析条件为：上柱流速1～1.5BV/h；3BV的0.03mol/L NH₄Cl预洗；5BV的0.3mol/LNH₄Cl洗脱，分段收集洗脱液并检测洗脱液杂质情况；从预洗开始，流速控制0.5～0.8BV/h。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5)中超滤使用的滤膜孔径为5000～7000Da；纳滤使用的滤膜孔径为400～500Da。

9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5)纳滤液体积相当于将步骤1)所取盐酸万古霉素结晶粉末配制为的溶液体积的1/5～1/4。

10.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤6)中高压液相色谱制备柱使用的分离条件为：制备填料为C18HCE；流动相A为乙腈；流动相B为0.1％(V/V)的三氟乙酸水溶液；梯度设置为表2所示：

表2

时间(min)	流动相B	流动相A	流速(mL/min)
0	92	8	70
31	83	17	70
33	8	92	70
35	10	90	70
37.1	93	7	100
45	93	7	100

检测波长为280nm。