[发明专利]一类Tetramic acid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一类Tetramicacid化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤、抗病毒药物中的应用。

背景技术

Tetramicacid(吡咯烷-2,4-二酮)类的天然产物通常可以从细菌、真菌以及海绵中分离得到[Schobert,R.；Andrea,S.Bioorg.Med.Chem.2008,16,4203–4221.]。它们的结构特征是含有1个吡咯-2,4-二酮的杂环片段，很长的侧链或由很多环聚合在一起等，其中含有十氢萘片段的tetramicacid类化合物经常在很多微生物的次生代谢产物中被发现，由于tetramicacid类化合物具有结构新颖、活性独特的特点[Li,G.；Kusari,S.；Spiteller,M.Nat.Prod.Rep.2014,31,1175–1201.]，因此，很多学者们对它们的生物合成、化学合成以及生物活性展开了广泛的研究。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一类具有抗肿瘤和抗病毒活性的Tetramicacid类化合物。

本发明通过多种柱层析及一维、二维核磁共振波谱，从真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的发酵液中分离得到一类新的Tetramicacid类化合物，这种化合物具有抑制多种癌症细胞和HSV-1病毒生长的活性，可用于制备抗肿瘤和抗病毒药物，从而实现了本发明的目的。

本发明的5个Tetramicacid类化合物，其结构如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)所示：

其中，式(Ⅰ)中

化合物1：

或化合物2：

或化合物4：

或化合物5：

或化合物3，其结构如式(Ⅱ)所示。

本发明的第二个目的是提供上述Tetramicacid类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物；

(2)将步骤(1)得到的固体发酵物的浸膏用乙酸乙酯、二氯甲烷或氯仿溶剂萃取，浓缩得到乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物；

(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯提取物、二氯甲烷提取物或氯仿提取物经过中压、常压硅胶柱层析，以水-甲醇、氯仿-甲醇、氯仿-丙酮、氯仿-乙酸乙酯、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯溶剂系统分别作为正反相洗脱剂，从体积比100:0到0:100进行梯度洗脱，用薄层层析追踪合并组分，经过SephadexLH-20凝胶柱层析得到粗品，经高效液相色谱纯化，得到Tetramicacid类化合物1-5。

步骤(1)中所述的真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021的固体发酵物是通过将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种到真菌适用的培养基中，在通常的发酵条件下制得。优选的制备方法是将真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021接种于PDA琼脂培养基中，28℃培养3天，得到培养有菌种的平板，然后将平板中菌种接种入液体培养基中，于转速180r/min摇床、温度28℃培养3天，得到种子液，再将种子液接种于大米培养基中，于28℃静置培养30天，得到固体发酵物，所述的液体培养基为每升含有葡萄糖10g，甘露醇20g，麦芽糖20g，玉米浆1g，味精10g，KH₂PO₄0.5g，MgSO₄0.3g，酵母浸膏3g，海盐30g，余量为水，pH7.0，所述的大米培养基为每600mL是这样配制的：将大米400g，酵母膏2g，葡萄糖2g，海盐18g，加入到容器中，然后用水定容到600ml。

本发明的第三个目的是提供真菌TrichobotryseffuseDFFSCS021在制备上述Tetramicacid类化合物中的应用。

通过体外抗肿瘤活性筛选实验，结果显示：本发明的Tetramicacid类化合物能抑制肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa、食管癌细胞株Eca109、前列腺癌细胞株PC-3、喉癌细胞株Hep-2、白血病细胞株KG-1a、单纯疱疹病毒HSV-1的生长，它们的IC₅₀值如表3所示，由此证明本发明的Tetramicacid类化合物可以用于制备抗肿瘤和抗病毒的药物。

因此，本发明的第三个目的是上述Tetramicacid类化合物在制备抗肿瘤或抗病毒药物中的应用。