[发明专利]一种亚硝酸细菌的保藏方法

说明书

本发明公开了一种亚硝酸细菌的保藏方法，包括（1）在亚硝酸细菌培养过程中投加生长促进剂，所述促进剂包括金属盐、多胺类物质、有机酸羟胺和Na₂SO₃，所述金属盐包括钙盐、铜盐、镁盐和/或亚铁盐；培养至氨氮去除率达99%、亚硝化率达80%时，收集菌体；（2）配制亚硝酸细菌保藏营养液；（3）将步骤（1）收集的亚硝酸细菌与步骤（2）配制的保藏营养液混合，控制pH为7.5‑9.0，含水率为40%‑80%；（4）添加保藏剂；（5）低温冷冻保藏。本发明在亚硝酸细菌培养过程中投加生长促进剂，可以使菌体快速增殖，提高亚硝化率，缩短培养时间；特别是可以提高菌体活性和耐低温能力，经低温冷冻藏后能够快速恢复活性。

技术领域

本发明涉及一种菌体保藏方法，具体涉及一种低温冷冻保藏亚硝酸细菌的方法。

背景技术

菌种是主要的生物资源之一，一个优良的菌种被选育出来以后，必须保持其优良性状不变或尽可能地少变慢变，才不至于降低菌体性能，能长期在生产中应用。菌种保藏方法有很多，冷冻保存是解决种质退化和防止自然积累性突变的一种有效途径，但传统的低温保存需要昂贵的程序降温仪器，步骤繁琐。完全玻璃化是低温保存的一种新方法，即在高浓度保护剂下，细胞连同保护剂于快速降温中都进入玻璃化状态，避免胞内冰晶形成，使器官和组织各部分都进入相同的状态，比其它低温保存方法具有设备简单、程序简单和冻存效果好等优点，在保存器官和组织的结构完整性方面具有独到之处。

微生物菌种保藏的基本原理主要是根据微生物生理生化特点，人工创造条件，使微生物代谢处于不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态，即采取低温、干燥、缺氧等条件，使菌种暂时处于休眠状态。一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。因此，在确定适宜的保藏方法的前提下，如何提高菌体的低温耐受性，对于维持菌体的优良性能、防止菌种退化具有重要意义。

生物脱氮的硝化过程是在好氧条件下通过硝酸菌或亚硝酸细菌将氨氮氧化为硝氮或亚硝氮，再通过缺氧条件下的反硝化菌将硝氮或亚硝氮还原成气态氮从水中除去。传统生物脱氮工艺中间浪费了一个将亚硝氮转化硝氮，硝氮又转化为亚硝氮的过程。短程硝化反硝化脱氮是将硝化反应控制在亚硝氮阶段，阻止亚硝氮的进一步硝化，然后直接进行反硝化。与传统硝化反硝化相比，短程硝化反硝化具有如下的优点：(1)硝化阶段可减少25%左右的需氧量，降低了能耗；(2)反硝化阶段可减少40%左右的有机碳源，降低了运行费用；(3)反应时问缩短，反应器容积可减小30%-40%左右；(4)具有较高的反硝化速率；(5)污泥产量降低；(6)减少了投碱量等。由此可见，控制硝化过程在亚硝化阶段具有重要意义，而完成短程硝化的高性能亚硝酸细菌被选育出来后，如何长期有效的保藏至关重要。

CN201210404073.8公开了一种亚硝酸细菌的保藏方法，包括：（（1）将亚硝酸细菌培养至亚硝化率达80%以上，并收集菌体；（2）配制亚硝酸细菌保藏营养液；（3）步骤（1）收集的亚硝酸细菌体与步骤（2）配制的亚硝酸细菌保藏营养液混合，pH为7.5-9.0，含水率为40%-80%，含水率指亚硝酸细菌保藏体系中水的重量含量；（4）添加保藏剂；（5）低温冷冻保藏。该方法可以延长菌种的保存时间，同时使菌种的活性保持相对的稳定。但是由于亚硝酸细菌生长较慢，需要将菌种培养至生长稳定期的周期较长。此外，菌体在低温保藏过程中，需要投加高浓度营养物质和大量保藏剂，保藏成本较高。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种亚硝酸细菌的保藏方法。本发明在亚硝酸细菌培养过程中投加生长促进剂，可以使菌体快速增殖，提高亚硝化率，缩短培养时间；特别是可以提高菌体活性和耐低温能力，经低温冷冻藏后能够快速恢复活性，保藏成本较低。

本发明亚硝酸细菌的保藏方法，包括如下步骤：