[发明专利]一种小麦秸秆腐熟剂及其制备方法

权利要求书

1.一种小麦秸秆腐熟剂，包括枯草芽孢杆菌、绿色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假丝酵母，所述的枯草芽孢杆菌、绿色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假丝酵母的质量比为2:1:2:2:1，其中，枯草芽孢杆菌≥0.6亿cfu/g、绿色木霉≥0.5亿cfu/g、黑曲霉≥0.4亿cfu/g、白腐真菌≥0.6亿cfu/g、假丝酵母≥0.2亿cfu/g，所述的小麦秸秆腐熟剂为液体。

2.一种小麦秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于：所述的小麦秸秆腐熟剂由枯草芽孢杆菌、绿色木霉、黑曲霉、白腐真菌和假丝酵母复混组配而成，具体步骤如下：

1)、制备培养基：

A、制备LB液体培养基：取胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g和NaCl10g溶解于1L的容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7.0～7.5，用水定容至1L，然后高压灭菌；

B、制备LB固体培养基：在步骤A制备的LB液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入量为15g/L；

C、制备PDA液体培养基：取马铃薯200g、葡萄糖20g溶解于1L的容量瓶中，用水定容至1L，然后高压灭菌；

D、制备PDA固体培养基：在步骤C制备的PDA液体培养基内加入琼脂，琼脂的加入量为15g/L；

E、制备PDA液体诱导培养基：取马铃薯200g、葡萄糖5g、羧甲基纤维素钠15g溶解于1L容量瓶中，用1M的NaOH调节pH值到7.0，定容至1L，高压灭菌；

F、制备PDA固体诱导培养基：在步骤E制备的PDA液体诱导培养基内加入琼脂，琼脂的加入量为15g/L。

2)、制备菌剂：

A、制备枯草芽孢杆菌菌液：

将实验室保存的枯草芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，在恒温箱内38℃培养24h，再把培养好的菌落接种于LB液体培养基中，保持温度在38℃，搅拌转速为200rpm摇瓶培养12h，得到枯草芽孢杆菌菌种液；然后将培养好的枯草芽孢杆菌菌种液接种于发酵罐中的LB液体培养基中，进行扩大再培养，得到枯草芽孢杆菌菌液，低温保存备用；

B、制备黑曲霉菌液：

将黑曲霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中30℃培养48h，待上面长出黑色菌丝后，转接于PDA液体培养基中，30℃，150rpm摇瓶培养72h，得到黑曲霉菌种液；然后将黑曲霉菌种液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到黑曲霉菌液，进行低温保存备用；

C、制备绿色木霉菌液：

将绿色木霉在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中32℃培养48h，挑上层面白色菌丝转接于PDA液体培养基中，32℃，180rpm摇瓶培养72h，待液体颜色变深，产生孢子，得到绿色木霉种液，再将绿色木霉种液转接到发酵罐中的发酵培养基中进行扩大再培养，得到绿色木霉菌液，进行低温保存；

D、制备白腐真菌菌液：

将白腐真菌在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中37℃培养48h，待长出菌丝后，转接于PDA液体培养基中，37℃，180rpm摇瓶培养72h，长出菌丝球，得到白腐真菌种液，然后将白腐真菌种液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到白腐真菌菌液，进行低温保存；

E、制备假丝酵母菌液：

将假丝酵母在无菌条件下接种于PDA固体斜面培养基上，在恒温箱中33℃培养48h，待上面长出菌落后，转接于PDA液体培养基中，33℃，200rpm摇瓶培养72h，然后将种子液转接到发酵罐中进行扩大再培养，得到假丝酵母菌液，进行低温保存；

3)、菌剂混合：

将步骤2)制得的枯草芽孢杆菌菌液、黑曲霉菌液、绿色木霉菌液、白腐真菌菌液和假丝酵母菌液按质量比为2:1:2:2:1进行混合，混合后得到的菌液为小麦秸秆腐熟剂，经测定，有效活菌数≥4亿cfu/g。