[发明专利]一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法

说明书

技术领域

本发明属于组织培养领域，具体涉及一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法。

背景技术

中国是世界第一大人口国，粮食问题非常突出，马铃薯(SonalmuutbeosrunlL.)是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物，也是粮、菜、饲料和工业原料兼用的经济作物，由于它高产稳产、适应性广、营养成分全等特点，且自身具有很高的营养价值和药用价值被广泛栽培。

马铃薯是冷凉作物，适合生长的区域比较广，在马铃薯栽培过程中，容易出现叶片皱缩卷曲，叶色浓淡不均，茎秆矮小细弱，块茎变形龟裂，产量逐年下降等“退化”现象，采用现代生物技术将种薯内的病毒去掉，恢复马铃薯品种本身的生理功能和生产特性，才能防止马铃薯的“退化”。

在进行马铃薯脱毒培养过程中，尤其是在夏季，因为高温高湿的环境极易感病死亡，同时，温度过高，植株的蒸腾作用加强，易失水造成死亡，从而影响脱毒苗的培养效率，一般脱毒苗在培养室进行培养，为了满足脱毒苗对光照的需求，往往会对脱毒苗进行补光，即在培养室增加日光灯进行补光，马铃薯适宜生长的温度在23-25℃，超过28℃则会影响继代培养苗的生长，通过补充日光灯的照射，尤其是在夏季使得培养室的温度达到30℃左右，有时甚至可达到32℃以上，而单单通过空调等外部降温设备都无法将温度降到脱毒苗生长适宜的温度范围内，对脱毒苗的生长受到抑制，进而影响栽培苗的质量。

综上所述，如何控制脱毒苗在培养室的环境温度，降低生产投入，减少脱毒苗的培养时间，成为本行业迫待解决而未解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是为了降低夏季在培养脱毒马铃薯试管苗的过程中，由于提供光照而造成的培养室温度过高，导致脱毒马铃薯继代培养苗的生长受到抑制。

本发明的技术方案是这样实现的：一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，包括品种选择、培养基的配制、灭菌、接种、继代培养过程，所述脱毒马铃薯试管苗在夏季的继代培养过程中，通过调节日间和夜间的日光灯的开关时间，控制培养室室内温度平衡，日间培养室的温度保持在23-25℃，夜间培养室的温度保持在16-17℃；所述日光灯每天18:00-19:00开启，次日早晨8:00-9:00关闭。

优选的，所述脱毒马铃薯试管苗在继代培养过程中的光照时间为14-15个小时/天。

更优选的，所述脱毒马铃薯试管苗的继代培养周期为24-28天。

优选的，所述脱毒马铃薯试管苗的继代培养过程中的光照强度为3000-5000Lx。

优选的，所述脱毒马铃薯试管苗的培养基为MS培养基。

更优选的，所述MS培养基中添加0.2mg/L的NAA。

相对于现有技术，本发明具有如下优点，继代培养方法可以降低由于为培养苗提供光照造成培养室温度过高，导致继代培养苗的生长受到抑制，造成烧苗、死苗的现象，通过培养室温度变化调整日光灯的开关时间，可极大节省电力能源的消耗，且培养方法比传统方法可节约6-21天的培养时间。

具体实施方式

下面结合具体实例，进一步阐述本发明。这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例一

选取三组继代培养苗作为试验，每组选取200个培养瓶。

品种选择：选择马铃薯品种天兴一号为试验品种，天兴一号为天津市天兴佳业科技有限公司自主研发品种。

1)MS培养基的配制：根据表1的母液配方表进行MS培养基母液的配制。

大量元素母液、微量元素母液、有机成分母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的纯净水彻底溶解，最后定容到1L。

铁盐母液的配制方法是：将称好的FeSO₄·7H₂O和Na₂-EDTA·2H₂O分别放到450mL纯净水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，最后定容到1L，保存在棕色玻璃瓶中。

分别量取5mL的微量元素母液、有机成分母液、铁盐母液，50mL的大量元素母液，并加入5-7g的琼脂和30g的绵白糖，加入纯净水定容至1L，将配制好的MS培养基放在电炉上加热至沸腾，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状，加入0.2mg/L的NAA-(萘乙酸)，用0.1mol/L的KOH将培养液的pH值调节至6.0-7.0，稍微冷却后分装至培养瓶中，每个培养瓶中分装MS培养基50ml。

2)灭菌：将上述培养瓶放入灭菌装置中进行125℃高压灭菌20分钟。