[发明专利]解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽及其制备方法

说明书

本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌多肽及其制备方法，属于抗菌多肽制备技术领域。本发明采用硫酸铵沉淀、脱盐、阴离子交换、排阻层析、疏水层析等纯化手段，纯化得到一种解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽。本发明的解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其分子量为3.0‑5.8KDa，对西瓜枯萎病菌最低抑菌浓度为0.031mg/mL。其表观形态为浅黄色粉末；其适用温度范围4‑80ºC；其适用pH范围1‑11。具有较强的热稳定性、耐酸碱，具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌多肽及其制备方法，属于抗菌多肽制备技术领域。

背景技术

植物病害主要成因是病原菌侵害植物，由此造成巨大的经济损失。化学农药在消灭病原菌，避免植物病害，减少损失等方面发挥了主要作用。但长期大量使用化学农药存在着潜在的危害，它引起环境污染，导致农副产品中农药残留增加，造成食品安全性问题日益严重，直接危害人类健康；化学农药在抑制病原菌的同时也杀伤了其他有益微生物、昆虫和畜禽，破坏了生态平衡；并且，病原真菌和细菌抗药性不断加深和扩大，不得不加大农药的施用量，从而会造成化学农药应用的恶性循环。

随着人们环保意识的增强，以及对化学农药负面影响的深入了解，如何高效杀死作物病原菌，同时维护生态平衡，获得优质、安全的农产品成为人们日益关注的问题，促使人们去寻求安全有效的植物病害防治途径。利用生物防治(即微生物代谢产物(农用抗生素)或微生物活菌制剂)防治植物病害不仅避免了化学农药带来的一系列问题，而且安全、有效和持久，己经发展成为防治植物病害的一种有效措施，受到广泛的关注。但目前限于微生物菌体的生物防治研究，拮抗微生物所分泌的次生代谢产物的防治研究还仅仅停留在实验室阶段。因此，从拮抗微生物中分离更加稳定高效的拮抗物质，为推广抗菌物质进行大规模防治植物病害创造条件，为防治植物病害的生物技术开发奠定基础。

解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens NCPSJ7自山东省莱芜市生姜大田土壤中分离得到，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2013098（专利申请号：CN201310112580.9，发明名称：广谱抗菌解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用），发明菌株的菌体及发酵液具有拮抗桃根霉腐烂病、黄瓜枯萎病、番茄灰霉病、枣炭疽病、梨黑斑病、梨青霉病、苹果褐腐病、苹果斑点落叶病、西瓜枯萎病等植物病原真菌引起的植物病害及果蔬采后病害以及拮抗金黄色葡萄球菌、甲型副伤寒沙门氏菌、副溶血性弧菌、酵母等食源性致病菌和腐败菌的作用。一种解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7抗菌蛋白产品及其制备方法，中国专利201410198531.6，公开了一种具有广谱抗菌性能的抗菌蛋白，其分子量为20-40kDa，其主要成分为：24kDa和36kDa两种抗菌蛋白；其外观形态表现为棕黄色粉末。实验证明，其对西瓜枯萎病菌最低抑菌浓度为0.086mg/mL。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能显著抑制西瓜枯萎病菌的活性的抑菌多肽及其制备方法。

本发明的技术方案

一种解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其分子量为3.0-5.8KDa，对西瓜枯萎病菌最低抑菌浓度为0.031mg/mL。

本发明的解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其表观形态为浅黄色粉末；其适用温度范围4-80ºC；其适用pH范围1-11。

上述解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，优选的，其分子量为3.0-4.5KDa；在此分子量范围内的多肽的抑菌活性更好。

一种上述解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽的制备方法，包括以下步骤：

（1）解淀粉芽孢杆菌发酵液离心后于上清液中加入硫酸铵至80%的饱和度，于4ºC静置24h后离心，沉淀用B复溶，得复溶液；

（2）将复溶液以B为缓冲液，用透析袋进行脱盐，得到浓缩液；