[发明专利]解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽及其制备方法有效
| 申请号： | 201510614247.7 | 申请日： | 2015-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN105111290B | 公开（公告）日： | 2018-07-03 |
| 发明（设计）人： | 裘纪莹;王军华;杜方岭;陈相艳;陈蕾蕾;周庆新;刘孝永 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院农产品研究所 |
| 主分类号： | C07K14/32 | 分类号： | C07K14/32;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/20;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张菡 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗菌多肽 芽胞杆菌 淀粉 制备 解淀粉芽孢杆菌 西瓜枯萎病菌 制备技术领域 硫酸铵沉淀 浅黄色粉末 阴离子交换 表观形态 排阻层析 热稳定性 疏水层析 耐酸碱 潜在的 脱盐 抑菌 应用 | ||
1.一种解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其特征在于，其分子量集中在3.0-5.8KDa之间，对西瓜枯萎病菌最低抑菌浓度为0.031mg/mL；
并采用以下方法制备获得：
（1）解淀粉芽孢杆菌发酵液离心后于上清液中加入硫酸铵至80%的饱和度，于4ºC静置24h后离心，沉淀用B复溶，得复溶液；
（2）将复溶液以B为缓冲液，用透析袋进行脱盐，得到浓缩液；
（3）浓缩液用DEAE阴离子交换层析柱进行分离：用B平衡层析柱，以NaCl含量为0.4mol/L的B为洗脱液洗脱，收集洗脱峰，得活性组分1；
（4）活性组分1用Superdex 75排阻层析柱分离：洗脱液为B，收集第二个洗脱峰，得活性组分2；
（5）活性组分2中的缓冲液用NaCl含量为1.5mol/L的B替换后用辛基琼脂糖-4疏水层析柱进行纯化：先进行0-100%B线形洗脱，然后进行B-C-ddH2O的梯度洗脱，梯度洗脱时收集洗脱峰，得产品；
所述B为pH为7.0、浓度为50 mmol/L的PBS；
所述C为浓度为20mmol/L的PBS；
所述透析袋的截留分子量MwCO≤3000。
2.根据权利要求1所述的解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其特征在于，其表观形态为浅黄色粉末；其适用温度范围4-80ºC；其适用pH范围1-11。
3.根据权利要求1或2所述的解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽，其特征在于，其分子量为3.0-4.5KDa。
4.一种权利要求1、2或3所述的解淀粉芽胞杆菌NCPSJ7抗菌多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）解淀粉芽孢杆菌发酵液离心后于上清液中加入硫酸铵至80%的饱和度，于4ºC静置24h后离心，沉淀用B复溶，得复溶液；
（2）将复溶液以B为缓冲液，用透析袋进行脱盐，得到浓缩液；
（3）浓缩液用DEAE阴离子交换层析柱进行分离：用B平衡层析柱，以NaCl含量为0.4mol/L的B为洗脱液洗脱，收集洗脱峰，得活性组分1；
（4）活性组分1用Superdex 75排阻层析柱分离：洗脱液为B，收集第二个洗脱峰，得活性组分2；
（5）活性组分2中的缓冲液用NaCl含量为1.5mol/L的B替换后用辛基琼脂糖-4疏水层析柱进行纯化：先进行0-100%B线形洗脱，然后进行B-C-ddH2O的梯度洗脱，梯度洗脱时收集洗脱峰，得产品；
所述B为pH为7.0、浓度为50 mmol/L的PBS；
所述C为浓度为20mmol/L的PBS；
所述透析袋的截留分子量MwCO≤3000。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，DEAE阴离子交换层析柱，是指柱径26mm、填料高100 mm的二乙基氨基乙基阴离子交换层析柱。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，Superdex 75排阻层析柱，柱径16 mm，填料层900 mm。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，辛基琼脂糖-4疏水层析柱，柱径16mm，填料层100 mm。
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