[发明专利]一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，具体的说，是一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺。

背景技术

决明子，中药名。是豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，以其有明目之功而名之。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明子味苦、甘、咸，性微寒，入肝、肾、大肠经；润肠通便，降脂明目，治疗便秘及高血脂，高血压。清肝明目，利水通便，有缓泻作用，降血压降血脂。

关于决明子古著论述有：

1、《本草纲目》：“除肝胆风热，淫肤白膜，青盲。”

2、《中华本草》述其应用较为广泛，载曰：“清肝益肾，明目，利水通便。主治目赤肿痛，羞明泪多、青盲、雀目、头痛头晕、视物昏暗、肝硬化腹水、小便不利，习惯性便秘。外治肿毒、癣疾。”

3、《本经》：“治青盲，目淫肤赤白膜，眼赤痛，泪出，久服益精光。”

4、《本草经疏》：“决明子，其味咸平，《别录》益以苦甘微寒而无毒。咸得水气，甘得土气，苦可泄热，平合胃气，寒能益阴泄热，足厥阴肝家正药也。亦入胆肾。肝开窍于目，瞳子神光属肾，故主青盲目淫，肤赤白膜，眼赤痛泪出。《别录》兼疗唇口青。《本经》久服益精光者，益阴泄热、大补肝肾之气所致也。”

5、《本草求真》：“决明子，除风散热。凡人目泪不收，眼痛不止，多属风热内淫，以致血不上行，治当即为驱逐；按此苦能泄热，咸能软坚，甘能补血，力薄气浮，又能升散风邪，故为治目收泪止痛要药。并可作枕以治头风，但此服之太过，搜风至甚，反招风害，故必合以蒺藜、甘菊、枸杞、生地、女贞实、槐实、谷精草相为补助，则功更胜。谓之决明，即是此意。”

6、《本草正义》：“决明子明目，乃滋益肝肾，以镇潜补阴为义，是培本之正治，非如温辛散风，寒凉降热之止为标病立法者可比，最为有利无弊。”

决明子蛋白质的总含量达18.56-22.93％，是主要的药用部分。

发明内容

本发明的目的在于设计出一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，能从决明子中进行分化提纯出决明子蛋白质，以备进行药物制备及研究，整个工艺精湛、实用、设计科学合理。

本发明通过下述技术方案实现：一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，包括以下具体工艺步骤：

1）决明子粗蛋白的提取，包括：

1-1）在常温条件下，将决明子碾碎为20—80目粉末后过筛，后在4-8℃环境下用石油醚或环己烷浸泡脱脂24-48小时，分2-4次进行；

1-2）回收溶剂，残渣按1g∶10-50ml的体积浸泡于50mmolpH为7.8的KH₂PO₄-NaOH中8-12小时，重复3-5次，合并提取液；

1-3）提取液离心24-28min，取上清液；上清液边搅拌边加入硫酸铵至48％-52％的饱和度，离心分离，保留沉淀；沉淀物在分子量3500-7800的透析袋中进行脱盐；

1-4）冷冻干燥仪中-30℃至-60℃温度下进行冷冻干燥，得到粉末状决明子粗蛋白，-25℃冷藏备用；

2）决明子粗蛋白的提纯，包括：

2-1）将上述方法得到的粉末状决明子粗蛋白充分溶解于18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl的缓冲液中；

2-2）用分子筛层析柱进行初步纯化，分子筛层析柱上样前先用含有0.2molNaCl的步骤2-1）所得缓冲液平衡2-5倍柱体积；每次上样量为200μl-220μl，监测波长为280nm，流速为0.4-0.6ml/min；决明子粗蛋白经分子筛层析被分成5个峰：分别为peak1、peak2、peak3、peak4和peak5；

3）决明子蛋白质peak2的分离纯化，包括：用离子交换柱纯化peak2，离子交换柱按照A液与B液依次交替的程序平衡，A液为18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl，B液为0.8molNaCl的A液；将peak2浓缩、脱盐，上样量为30mg-40mg/ml；离子交换柱用0-1.0mol的NaCl梯度、18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl的缓冲液进行洗脱，流速为0.8-1.5ml/min；peak2经离子交换柱层析被分成3个峰，分别为：peakI、peakII和peakIII，收集peakII。

进一步的为更好的实现本发明，所述步骤1-1）中，石油醚脱脂时间为32小时，分2次进行。

进一步的为更好的实现本发明，所述步骤1-3）中，脱盐时，选分子量3500的透析袋，透析液为双蒸水，每6小时更换一次透析液。