[发明专利]一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺

权利要求书

1.一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：包括以下具体工艺步骤：

1）决明子粗蛋白的提取，包括：

1-1）在常温条件下，将决明子碾碎为20—80目粉末后过筛，后在4-8℃环境下用石油醚或环己烷浸泡脱脂24-48小时，分2-4次进行；

1-2）回收溶剂，残渣按1g∶10-50ml的体积浸泡于50mmolpH为7.8的KH₂PO₄-NaOH中8-12小时，重复3-5次，合并提取液；

1-3）提取液离心24-28min，取上清液；上清液边搅拌边加入硫酸铵至48％-52％的饱和度，离心分离，保留沉淀；沉淀物在分子量3500-7800的透析袋中进行脱盐；

1-4）冷冻干燥仪中-30℃至-60℃温度下进行冷冻干燥，得到粉末状决明子粗蛋白，-25℃冷藏备用；

2）决明子粗蛋白的提纯，包括：

2-1）将上述方法得到的粉末状决明子粗蛋白充分溶解于18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl的缓冲液中；

2-2）用分子筛层析柱进行初步纯化，分子筛层析柱上样前先用含有0.2molNaCl的步骤2-1）所得缓冲液平衡2-5倍柱体积；每次上样量为200μl-220μl，监测波长为280nm，流速为0.4-0.6ml/min；决明子粗蛋白经分子筛层析被分成5个峰：分别为peak1、peak2、peak3、peak4和peak5；

3）决明子蛋白质peak2的分离纯化，包括：用离子交换柱纯化peak2，离子交换柱按照A液与B液依次交替的程序平衡，A液为18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl，B液为0.8molNaCl的A液；将peak2浓缩、脱盐，上样量为30mg-40mg/ml；离子交换柱用0-1.0mol的NaCl梯度、18mmol-22mmolpH为7.2-7.8的Tris-HCl的缓冲液进行洗脱，流速为0.8-1.5ml/min；peak2经离子交换柱层析被分成3个峰，分别为：peakI、peakII和peakIII，收集peakII。

2.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤1-1）中，石油醚脱脂时间为32小时，分2次进行。

3.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤1-3）中，脱盐时，选分子量3500的透析袋，透析液为双蒸水，每6小时更换一次透析液。

4.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤1）中，脱盐后，先在-20℃冰箱中冷冻24小时，再转入冷冻干燥仪-60℃中冷冻干燥64小时。

5.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤2-1）中，在进行用分子筛层析柱进行初步纯化时，分子筛的再生按0.1molHCl→H₂O→0.5molNaOH→H₂O→缓冲液的程序进行，采用缓冲液是0.2molNaCl、20mmolpH为7.2的Tris-HCl。

6.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤2-1）中，选缓冲液平衡2倍柱体积，每次上样量为200μl，监测波长为280nm，流速为0.5ml/min。

7.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤3）中，在进行决明子蛋白质peak2的分离纯化时，离子交换柱的再生按0.1molHCl→H₂O→0.5molNaOH→H₂O→A液的程序进行：缓冲液中A液为20mmolTris-HCl，pH为7.2。

8.根据权利要求1所述的一种从中药决明子中提取蛋白质的工艺，其特征在于：所述步骤3）中，在进行决明子蛋白质peak2的分离纯化时，离子交换柱的平衡按照10mlA液→20mlB液→20mlA液→20mlB液→10mlA液的程序进行，用0-1.0mol的NaCl梯度、20mmolpH7.2的Tris-HCl缓冲液洗脱，流速为1.2ml/min。