[发明专利]一种快速、高通量提取植物基因组DNA的方法及应用在审
申请号: | 201510599233.2 | 申请日: | 2015-09-18 |
公开(公告)号: | CN105087550A | 公开(公告)日: | 2015-11-25 |
发明(设计)人: | 徐晓辉;孙伟;路兴波;孙红炜;李凡;高瑞;杨淑珂 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院植物保护研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 250100 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 通量 提取 植物 基因组 dna 方法 应用 | ||
1.一种快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取待提取的植物组织加入SDS提取液混匀,并充分研磨;所述SDS提取液配方为:80-120mMTris·HCl,40-60mMEDTA,80-120mMNaCl,0.5-1.5%w/vSDS,pH8.0;
(2)将研磨后的样品于60-70℃加热5~10min,并于室温下高速离心处理;随后吸取样品上清液,并加入等体积的异丙醇混匀,室温下静置处理;
(3)将静置处理后的样品再次高速离心处理,并除去上清液,随后加入质量浓度不低于70%的乙醇,充分混匀;
(4)将混合后的样品再次高速离心处理,完全弃去上清液后,将所述样品干燥处理;
(5)向干燥后的样品中加入双蒸水,于35-40℃温度下静置,并常规保存,即得所需的植物基因组DNA作为模板进行后续的PCR反应。
2.根据权利要求1所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述SDS提取液配方为:100mMTris·HCl,50mMEDTA,100mMNaCl,1%w/vSDS,pH8.0。
3.根据权利要求1或2所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述植物组织的质量与所述SDS提取液的体积比为1∶0.2-0.5,其中,所述质量与体积的比例单位为g/mL。
4.根据权利要求3所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述植物组织的质量与所述SDS提取液的体积比为1∶0.3。
5.根据权利要求1-4任一所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)、(3)和(4)中,所述高速离心步骤的转速彼此独立的为10000-12000rpm,并离心处理8-15min。
6.根据权利要求1-5任一所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述植物组织包括植物的幼苗、子叶、真叶、嫩茎或嫩根部位组织。
7.根据权利要求6所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述植物包括棉花、油菜、水稻、玉米、小麦或者大豆。
8.根据权利要求1-7任一所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述研磨步骤是利用高通量组织研磨仪进行研磨。
9.根据权利要求1-8任一所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述干燥步骤为真空干燥。
10.根据权利要求9所述的快速、高通量提取植物基因组DNA的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述干燥温度为50-70℃。
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