[发明专利]一种基于生物素化氨基化Fe3O4与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素多重放大免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

肿瘤的发病率高，不易察觉，我国病例数相当庞大，占全世界病例数的55%，且肿瘤的生长和转移的速度快，对人类的健康产生极大危害。肿瘤标志物的灵敏检测，在临床上对于肿瘤的早期发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，引起人们的广泛关注。

目前电化学免疫传感器已经广泛用于肿瘤标志物的检测，夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。

本发明中使用的石墨烯是褶皱的二维平面薄膜，具有大的比表面积，良好的电子传递能力和催化性能，能有效吸附固载抗体。SnO₂纳米粒子原位吸附在石墨烯表面，有效地避免了石墨烯片层的堆叠，而聚苯胺加入后可以大大的提高SnO₂的电化学性质，并且聚苯胺的存在可以使SnO₂负载石墨与抗体通过氨基更牢固的键合在一起。

发明内容

本发明提供了一种生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素多重放大免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肿瘤标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器应用于肿瘤标志物的高灵敏、特异性检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤。

1.一种基于生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为3~5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6μL、0.5~1.5mg/mL的SnO₂负载石墨烯聚苯胺滴涂到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6μL、8~12μg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（4）继续将3μL、0.5~1.5mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6μL、0.0005~10ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥；

（6）将6μL、1~3mg/mL的生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干；

（7）将6μL、0.1~0.3mg/mL的链霉亲和素溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干；

（8）将6μL、1~3mg/mL的生物素化氨基化Fe₃O₄溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一种基于生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器。

2.所用SnO₂负载石墨烯聚苯胺、生物素化氨基化Fe₃O₄、生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液的制备

（1）SnO₂负载石墨烯聚苯胺的制备

称取40~60mg的SnO₂负载石墨烯，量取10mLN，N-二甲基甲酰胺，混合于50mL烧杯中，继续加入0.04~0.06mL苯胺，1~2mL，质量分数为37%的盐酸HCl溶液，磁力搅拌1h，后称取0.05~0.15g过硫酸铵加入上述烧杯中，室温下超声反应12h；离心分离得到SnO₂负载石墨烯聚苯胺；

（2）生物素化氨基化Fe₃O₄的制备

①氨基化Fe₃O₄的合成