[发明专利]一种基于生物素化氨基化Fe3O4与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种基于生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径为3~5mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6μL、0.5~1.5mg/mL的SnO₂负载石墨烯聚苯胺滴涂到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6μL、8~12μg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中干燥；

（4）继续将3μL、0.5~1.5mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6μL、0.0005~10ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中干燥；

（6）将6μL、1~3mg/mL的生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干；

（7）将6μL、0.1~0.3mg/mL的链霉亲和素溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干；

（8）将6μL、1~3mg/mL的生物素化氨基化Fe₃O₄溶液，滴涂于电极表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一种基于生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种基于生物素化氨基化Fe₃O₄与链霉亲和素的免疫传感器的制备方法，所述SnO₂负载石墨烯聚苯胺、生物素化氨基化Fe₃O₄、生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液的制备，步骤如下：

（1）SnO₂负载石墨烯聚苯胺的制备

称取40~60mg的SnO₂负载石墨烯，量取10mLN，N-二甲基甲酰胺，混合于50mL烧杯中，继续加入0.04~0.06mL苯胺，1~2mL，质量分数为37%的盐酸HCl溶液，磁力搅拌1h，后称取0.05~0.15g过硫酸铵加入上述烧杯中，室温下超声反应12h；离心分离得到SnO₂负载石墨烯聚苯胺；

（2）生物素化氨基化Fe₃O₄的制备

①氨基化Fe₃O₄的合成

称取0.5~1.5gFe₃O₄溶解于50ml无水乙醇中，超声时间1h，在恒温40℃、搅拌条件下加入2~6g的3-氨丙基三乙氧基硅烷，搅拌时间8h；后磁分离，水洗三次，乙醇洗涤三次，室温干燥，制得氨基化Fe₃O₄；

②生物素化氨基化Fe₃O₄的合成

将1.5~2.5mg生物素氨基乙酸n-羟基琥珀酰亚胺溶于1ml的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入10~30mg氨基化磁性Fe₃O₄和30mLpH7.4的磷酸盐缓冲溶液，37℃下搅拌12h，分别用N，N-二甲基甲酰胺和水进行三次洗涤，室温干燥，制得生物素化氨基化Fe₃O₄；

（3）生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液的制备

将1~3mg生物素氨基乙酸n-羟基琥珀酰亚胺溶于1mL的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中，震荡溶解，再加入100μL、80~120μg/mL的肿瘤标志物检测抗体溶液和900μL、50mmol/L的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液，4℃恒温振荡培养箱中振荡，孵化12h，制得生物素化的肿瘤标志物检测抗体B-Ab₂溶液，4℃下保存备用。