[发明专利]一种乳腺癌干细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201510593579.1 | 申请日： | 2015-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN105087494A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 樊菁;张凌;王廷;李南林;吕勇刚 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N5/095 | 分类号： | C12N5/095 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 710032 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 乳腺癌 干细胞 培养 方法 | ||
1.一种乳腺癌干细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将获得单细胞状态的人乳腺癌细胞，加入含10％胎牛血清的RPMI-1640完全培养基中，制成细胞悬液；
S2、取对数生长期细胞悬液加入适量鲑鱼凝血酶，使凝血酶的浓度为1～4U/mL，混合均匀后，等体积加入浓度为1.5～3mg/mL的鲑鱼胶原蛋白原，得混合液；
S3、按5×103～5×104个/mL的密度将混合液接种于超低粘附力的BME的96孔板内，36～38℃下保温，使其凝固成软凝胶；
S4、在软凝胶上方加入体积为混合液1～2倍的DMEM/F12培养液、1×B-27、25～75ng/ml的上皮生长因子、10～30ng/ml成纤维细胞生长因子、50ng/ml的胰岛素样生长因子-1和0.4-0.6ng/ml氢化可的松中培养7天，得乳腺癌干细胞微球。
2.根据权利要求1所述的一种乳腺癌干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤S4中的培养条件为：温度37℃，5％CO2，且每周更换培养基2-3次。
3.根据权利要求1所述的一种乳腺癌干细胞的培养方法，其特征在于，所述浓度为1.5～3mg/mL的鲑鱼胶原蛋白原采用完全培养基和鲑鱼胶原蛋白原配制。
4.根据权利要求3所述的一种乳腺癌干细胞的培养方法，其特征在于，所述完全培养基为添加有9～16v/v％胎牛血清、82～158U/ml青霉素和82～158mg/ml链霉素的高糖DMEM培养基。
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