[发明专利]一种灵芝孢子粉原料有效成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体是建立测定灵芝孢子粉原料及其产品中有效成分的方法。

背景技术

灵芝(GanodemalingzhiShengH.Wuetal.)是一种药用价值很高的名贵真菌，灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出来的卵形生殖细胞，由于灵芝孢子粉具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎等多种生物活性，越来越多地被用于保健和医药产品之中。目前灵芝孢子粉保健食品已有上百个，市场占有率也非常高，主要以灵芝孢子粉散剂和灵芝孢子油胶囊为主。

由于灵芝孢子粉品种繁多、分布广泛、采收时间长，各地的地理环境、气候因素、采收时间、储存条件等都可能会影响灵芝孢子粉的质量，导致市场上灵芝孢子粉产品的质量良莠不齐，比较混乱。现有的关于灵芝孢子粉的质量评价标准比较缺乏，仅有粗多糖和少量核苷类成分的含量测定分析。为了更客观的评价和反映各种因素等对灵芝孢子粉的质量影响、控制其产品质量，规范产品优劣等级，我们从灵芝孢子粉中首次分离纯化得到一个化合物，经鉴定为麦角硫因。麦角硫因是天然稀有的手性氨基酸类强抗氧化剂，具有多种生物活性如抗氧化、抗辐射等多种功能。

核苷类成分是生物细胞维持生命活动的基本组成元素，参与DNA代谢过程，具有抗肿瘤、抗病毒、镇静中枢神经、基因治疗(Kinahanetal.1981)、心肌保护(Elyetal.1985)等多种生物活性，具有广泛的用途，已研究开发了多种产品(吕爱娟和吴皓2006)。《中国药典》2010年版已将腺苷的含量测定作为冬虫夏草的质量控制指标，此类成分作为质量控制的指标越来越受到重视(孔德平等2011；Gaoetal.2007)。

目前分离核苷类物质常采用含磷酸盐缓冲液的流动相和不含磷酸盐缓冲液的流动相(周惠燕等2011)，磷酸盐难溶于有机溶剂，使用不当易析出，使色谱柱保留能力下降，柱效降低，缩短其使用寿命。因此本研究选择甲醇‐水梯度系统用于C₁₈色谱柱的洗脱，参考灵芝及其他中药中核苷类成分的分析测定方法(曹琰等2010；刘玉军等2013；周芬霞等2013；孔德平等2011；Yuanetal.2008)，对流动相比例进行优化，从而对不同破壁时间、不同采样时期及黄山、大别山、奉化、龙泉4个产区的灵芝孢子粉中的胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2’‐脱氧鸟苷、胸苷、腺苷、2’‐脱氧腺苷、虫草素等15种核苷类成分同时进行含量测定，并对不同样品间的差异性进行分析，为评价破壁情况、采收时间和产地因素对灵芝孢子粉质量的影响打下理论基础，为灵芝孢子粉的质量控制提供参考依据。

建立一个活性成分的检测方法对灵芝孢子粉质量控制具有十分重要的意义。

发明内容

本发明涉及一种灵芝孢子粉原料有效成分的检测方法，包括以下步骤：

麦角硫因的高效液相色谱检测。

本发明涉及一种灵芝孢子粉原料有效成分的检测方法，包括以下步骤：

麦角硫因的高效液相色谱检测，核苷类成分的高效液相色谱检测。

本发明涉及一种灵芝孢子粉原料有效成分的检测方法，包括以下步骤：

A灵芝孢子粉的预处理步骤，将灵芝孢子粉加入溶剂浸提，得到浸提液，过滤，得到滤液；

B高效液相色谱检测步骤，对待测样品的滤液进行高效液相色谱分析；

C指标成分是麦角硫因、和、或、核苷类成分。

本发明涉及建立灵芝孢子粉中活性成分麦角硫因的测定方法。

本发明涉及一种灵芝孢子粉原料有效成分的检测方法，包括以下步骤：

1)灵芝孢子粉的预处理步骤，将灵芝孢子粉加入溶剂浸提，得到浸提液，过滤，得到滤液；

2)高效液相色谱检测步骤，对待测样品的滤液进行高效液相色谱分析；

3)指标成分是麦角硫因。

更具体地，本发明涉及的灵芝孢子粉的预处理步骤中，

浸提方法可以包括但不限于水浴浸提、磁力搅拌浸提、超声浸提；

浸提可以为一次性浸提或反复浸提；浸提温度为20-100℃，优选60-90℃，最优选60℃；浸提总时间为30-120min，优选60-90min，最优选60min；

浸提液固液分离的方法可以包括但不限于离心、过滤和抽滤；过滤步骤中选择孔径0.1-0.45μm的水相微孔滤膜，优选0.22μm孔径的水相微孔滤膜；浸提过程中超声功率为600W，频率40kHz。

本发明所述的灵芝孢子粉的麦角硫因高效液相色谱检测的条件如下：