[发明专利]一种DC-CIK细胞培养试剂及其培养方法

权利要求书

1.一种DC-CIK细胞培养试剂，其特征在于，由DC细胞培养试剂、CIK细胞培养试剂、共培养试剂组成；

所述DC细胞培养试剂由第一DC细胞培养试剂和第二DC细胞培养试剂组成；所述第一DC细胞培养试剂由GM-SCF、IL-4和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第一DC细胞培养试剂中，GM-CSF的浓度为100～1000U/mL，IL-4的浓度为100～1000U/mL；所述第二DC细胞培养试剂由GM-SCF、IL-4、TNF-α、MDC和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第二DC细胞培养试剂中，GM-SCF的浓度为50～500U/mL，IL-4的浓度为50～500U/mL，TNF-α的浓度为100～1000U/mL，MDC的浓度为1～20ng/mL；

所述CIK细胞培养试剂由第一CIK细胞培养试剂和第二CIK细胞培养试剂组成；所述第一CIK细胞培养试剂由INF-γ和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第一CIK细胞培养试剂中，INF-γ的浓度为500～2000U/mL；所述第二CIK细胞培养试剂由OKT-3、IL-1α、IL-2和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第二CIK细胞培养试剂中，OKT-3的浓度为10～100ng/mL，IL-1α的浓度为50～200U/mL，IL-2的浓度为100～1000U/mL；

所述共培养试剂由IL-2和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述共培养试剂中，IL-2的浓度为100～500U/mL。

2.一种DC-CIK细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：将单个核细胞进行细胞培养，获得贴壁细胞和悬浮细胞；

步骤2：采用第一DC细胞培养试剂培养所述贴壁细胞，培养4～6天后，采用第二DC细胞培养试剂培养24-48h，得到DC细胞；所述第一DC细胞培养试剂由GM-SCF、IL-4和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第一DC细胞培养试剂中，GM-CSF的浓度为100～1000U/mL，IL-4的浓度为100～1000U/mL；所述第二DC细胞培养试剂由GM-SCF、IL-4、TNF-α、MDC和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第二DC细胞培养试剂中，GM-SCF的浓度为50～500U/mL，IL-4的浓度为50～500U/mL，TNF-α的浓度为100～1000U/mL，MDC的浓度为1～20ng/mL；

采用第一CIK细胞培养试剂培养所述悬浮细胞，培养1～3天后，采用第二CIK细胞培养试剂继续培养7～8天，继续培养过程中每隔3天补加IL-2，获得CIK细胞；所述第一CIK细胞培养试剂由INF-γ和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第一CIK细胞培养试剂中，INF-γ的浓度为500～2000U/mL；所述第二CIK细胞培养试剂由OKT-3、IL-1α、IL-2和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述第二CIK细胞培养试剂中，OKT-3的浓度为10～100ng/mL，IL-1α的浓度为50～200U/mL，IL-2的浓度为100～1000U/mL；

步骤3：将所述DC细胞和所述CIK细胞混合，采用共培养试剂培养5～8天，得到DC-CIK细胞；所述共培养试剂由IL-2和含有体积百分含量5％～15％血浆的无血清培养基组成；所述共培养试剂中，IL-2的浓度为100～500U/mL。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤2中维持细胞密度为(5～15)×10⁵/mL。