[发明专利]一种食品中微生物快速检测方法

说明书

本发明属于食品检测领域，提供一种食品中微生物快速检测方法及检测前快速处理装置。该方法包括(1)食品预处理；(2)第一次膜过滤(3)第二次膜过滤(4)微生物细胞裂解‑ATP检测前一体化处理(5)微生物检测。所述装置包括：瓶体(1)，与瓶体内壁紧密贴合的活塞(2)，活塞杆(3)，第一过滤膜(4)、细胞裂解‑ATP检测前一体化处理室(6)、第二过滤膜(8)。利用本发明方法对食品样品进行预处理，能够有效消除食品本身对检测体系的影响。本发明装置也提供一种方便、快速、高效的食品中微生物检测前快速方式，减少操作过程中不必要的步骤，更可以消除食品本身所携带的细胞及游离ATP的影响，提高检测准确性，轻巧方便。

技术领域

本发明属于食品检测领域，涉及一种食品中卫生物快速检测方法及检测前快速处理装置。

背景技术

随着我国经济的不断发展，食品种类越来越丰富，而新的食品安全问题亦不断涌现，严重影响了人民群众的生命安全及社会经济的可持续发展。食品中微生物总数的检测是确保食品安全的一个重要检测项目。目前我国普遍采用平板菌落计数检验法进行检测，从采集样品，微生物细胞稀释、涂布、培养到取得结果至少需要24-48小时，因此，难于从生产原料、生产设备层面、物流、销售等方面进行实时有效的监测，造成产品质量下降、资源浪费，食品安全事故频发。

所有生物，包括细菌细胞在内都有数量相对稳定的生物能量物质，三磷酸腺苷(ATP)。美国太空总署用荧光素酶检测月球样品中是否含有痕迹量ATP，作为月球存在或者有过生命存在的佐证。早在1884年，Dubois发现将萤火虫研磨后荧光很快会消失，添加萤火虫尾部的新鲜提取物后又能重现荧光。此后，他证实提取物中存在荧光素和荧光素酶的相互作用，并指出在有氧分子、ATP的条件下，虫光素酶可催化荧光素氧化并发出便于灵敏检测的荧光。且上述反应遵循细胞数越多，ATP能量越高，荧光值越高的线性比例关系。上世纪80年代后，美、英、德、日根据上述原理先后设计生产出各种形式的可付诸使用的细菌总数的快速检测系统系列产品，用于样品中微生物总数的测定，在几分钟内就可获得结果，大大缩短了检测时间。但所有生物体内均含有ATP，包括食品中可能存在的动植物细胞。食品中动植物细胞及可能的游离ATP的存在对检测结果的准确性将会产生影响，限制了该方法在食品领域的应用范围。所以，ATP方法自二十世纪80年代问世后，在很长一段时间内只能用于对食品加工环境、器具或包装进行检测，不能检测食品成品本身。

发明内容

本发明通过开发分级裂解与过滤食品样品的装置，消除了食品体系中非微生物细胞及游离ATP对测定结果的影响，拓宽了ATP检测方法在食品领域的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现

1.本发明提供一种食品中微生物快速检测方法，该方法包括如下步骤：

(1)食品预处理：用拭子轻拭样品表面后，将拭子置于无菌的4.5-5ml 0.1-0.2MpH 7.0-7.4的PBS缓冲液中荡洗干净，获得样品液；

(2)第一次膜过滤：室温下，将上述步骤(1)获得的样品液通过孔径为10-20um的过滤膜，得到过滤液1；

(3)第二次膜过滤：室温下，将上述步骤(2)获得的过滤液1通过孔径为0.2～0.5um的过滤膜，截获膜上微生物细胞；

(4)微生物细胞裂解—ATP检测前一体化处理：将步骤(3)截获的微生物细胞通过细胞裂解与ATP检测一体化试剂，室温下反应10-15s，获得样品处理液；

其中，细胞裂解与ATP检测一体化试剂为：1-2％Triton X-100、100-120mmolNaCl、 0.1-0.5％脂肽类表面活性剂、2-2.5ul荧光素酶，0.1-0.15mg/ml荧光素，1-1.5mMDTT， 4.5-5mM MgSO4，20-25mM N-三(羟甲基)甲基甘氨酸，pH 7.8；反应量为：每100ul上述一体化试剂加入1.5-2ul样品液；