[发明专利]一种大丽花脱毒苗的获取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种大丽花脱毒苗的获取方法，具体涉及一种通过两次脱分化产生愈伤组织并将愈伤组织热处理后再分化、最终高效获得大丽花脱毒幼苗的方法。

背景技术

大丽花（DahliapinnataCav）为菊科大丽花属多年生球根花卉，全属约27种，又名大理菊、天竺牡丹、西番莲、洋芍药、大丽菊、地瓜花、红苕花等，原产墨西哥、哥伦比亚及危地马拉等国，后传到欧洲、日本和我国。大丽花茎杆粗壮，叶片肥大，花形与牡丹相似，花大而色彩艳丽，具有花姿优美、花型多样、花期长、品种繁多等特点，被誉为花卉中的宠儿。大丽花系天然种间杂交，人工选育的历史不长，世界各国普遍栽培，目前在东北、西北、华北等地栽培较广泛，其中在广东秋、冬两季栽培比较多。经过人工杂交选择，成为异源八倍体，新品种层出不穷，花色娇艳，花期长，适应性强，易于栽培，故一跃成为世界名花。目前大丽花是墨西哥的国花，西雅图的市花，我国吉林省的省花，张家口、赤峰、包头（小丽花）等城市的市花，大丽花象征大方、富丽，大吉大利，是世界著名的观赏花卉。

大丽花通常采用分根和扦插繁殖，但分根和扦插繁殖繁殖系数低，但每株每年仅可分出5-6个新株，无法满足产业化生产的要求，并且一直用分株繁殖，容易使病毒逐代积累，从而造成大丽花品种退化严重。

利用组织培养、离体快繁等技术进行茎尖脱毒培养，可以解决大丽花病毒病的问题。国内一些研究者采用大丽花外植体，进行了组织培养和脱毒技术的研究，获得了一些研究进展，但是大丽花的组织培养和脱毒技术国内研究起步较晚，研究积累少，目前大丽花的脱毒技术还有待进步，脱毒效率低、操作繁琐已经严重阻碍了大丽花品质的提高和生产的需求，因此对大丽花进行组织培养、离体快繁技术研究，建立并优化一种高效的脱毒苗培育技术，有重大的产业价值和广阔的市场开发前景。

发明内容

本发明的目的是针对现有大丽花脱毒技术存在的不足，提供一种可持续化、易操作且能够规模化生产的高效获得大丽花脱毒苗的方法，该方法解决了现有脱毒技术的脱毒不彻底、操作繁琐的难题，能够满足工厂化脱毒生产的需要。

本发明的目的是通过以下技术方案解决的：

一种大丽花脱毒苗的获取方法，其特征在于：该方法步骤如下：

1）采集大丽花嫩叶，脱分化产生愈伤组织；

2）将愈伤组织进行热处理，然后将愈伤组织继续诱导出不定芽、不定芽生根培养成健壮的组培苗；

3）进一步剥离组培苗茎尖，脱分化产生愈伤组织；

4）再次将愈伤组织进行热处理后诱导成苗；

5）随机抽取步骤4）中的组培苗，进行病毒检测，若检测合格即大丽花脱毒种苗，若不合格需重复1）到4）步，直到获得合格的大丽花脱毒种苗。

该方法的详细步骤如下：

1）采集大丽花嫩叶，脱分化产生愈伤组织：

采集生长至现蕾期的健康无病的大丽花的嫩叶，自来水洗净，流水冲洗30min，用70%酒精浸泡15s，0.1%升汞内加数滴吐温-20溶液浸泡15min，并用玻璃棒搅动，用无菌水冲洗4-5次，滤纸吸干，用孔直径5mm的打孔器打孔，将打下的叶片接种到愈伤诱导培养基上25-27℃条件下暗培养，10-15天后产生淡黄绿色疏松的愈伤组织；

2）将愈伤组织进行热处理，然后将愈伤组织继续诱导出不定芽、不定芽生根培养成健壮的组培苗：

将生长至大米粒大小、带有少量外植体的愈伤组织转移到培养箱中热处理，切除褐化块段后将愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上25-27℃条件下光培养，20-30天后愈伤组织分化出不定芽，将再生出来的高度1cm以上的芽转接至生根培养基培养成健壮的组培苗；

3）进一步剥离组培苗茎尖，脱分化产生愈伤组织：

待组培苗生长至5cm-8cm，剥取0.4-0.6cm大小的茎尖生长点接种到茎尖诱导愈伤培养基上，在25-27℃条件下暗培养30-45天，诱导出愈伤组织；

4）再次将愈伤组织进行热处理后诱导成苗：

再次将茎尖愈伤组织进行热处理，切除褐化块段后将愈伤组织转接到不定芽诱导培养基上，25-27℃条件下光培养20-25天后诱导出不定芽，然后转接入生根培养基，40-50天后可得到大丽花幼苗；

5）随机抽取步骤4）中的组培苗，进行病毒检测，若检测合格即大丽花脱毒种苗，若不合格需重复1）到4）步，直到获得合格的大丽花脱毒种苗：