[发明专利]一种樟树叶片快速冰冻切片方法

权利要求书

1.一种樟树叶片快速冰冻切片方法，该方法所使用的冰冻切片机为莱卡CM3050S，它包括切片机降温开关（1），切片机箱（2），机头（3），旋转杠杆（4），冰冻台（5）；其特征在于：按如下步骤制备：

步骤1）将切取的樟树叶片立即投入到质量分数为4%多聚甲醛固定液中，在4℃下，固定2-3h，用100mmol/L磷酸缓冲液，浸洗2-3次，制得樟树叶片样品，备用；

步骤2）启动切片机降温开关（1），切片机箱（2）的温度维持在-20℃，冰冻台（5）的温度降低到-20℃，将经过步骤1）处理得到的樟树叶片样品，用OCT冰冻切片包埋剂均匀涂抹，使樟树叶片样品深埋其中，完成包埋，并迅速冷却固定在样品台上，制得樟树叶片预切样品；

步骤3）将经过步骤2）制得的樟树叶片预切样品连同样品台移至切片机的机头，拧紧机头的螺丝，摇动机身外的旋转杠杆（4）进行修块，修块完成后，将樟树叶片样品台连同包埋块拿出切片机箱，室温下放置20-30s，使包埋块变软，制得樟树叶片样品包埋块；

步骤4）将经过上述步骤3）处理后的樟树叶片样品包埋块，迅速放入切片机箱（2）进行切片，切片厚度为10-20μm，切片过程控制在15-20s完成，制得樟树叶片样品切片；

步骤5）将经过上述步骤4）切好的樟树叶片样品切片，用解剖针轻轻地碰触切片周围的包埋剂，使切片附着在解剖针上，通过解剖针将切片转移到机箱外的载玻片上进行展片；

步骤6）经过步骤5）处理完全展开的切片，直接在切片上进行染色或组织化学分析，显微镜下观察拍照。