[发明专利]一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法。

(二)背景技术:

美拉德反应是广泛存在于食品工业的一种羟基化合物(还原糖类)和氨基化合物(氨基酸和蛋白质)间的反应，又称羟氨反应，经历复杂的过程最终生成棕色甚至黑色的大分子物质。美拉德反应一方面会造成食品营养价值下降，但另一方面能赋予食品一定的风味，研究表明其主要产物具有良好的抗菌性和乳化性等功能，如Eun JungCho用蒸汽加热高丽参发现，随加热时间的延长，其富含的美拉德产物表现出强大的抗氧化性。美拉德产物是食品储藏和加工过程中自身产生的一类物质，是无毒副作用的天然食品抗氧化剂，可以与一些人工合成的具有潜在毒副和致癌作用的抗氧化剂相媲美。

受饮食习惯影响，我国每年的猪皮产量相对较高，其初级加工产品明胶作为医药和食品工业材料，主要用于直接添加,在明胶改性或者修饰应用领域甚少。目前美拉德反应研究多集中在蛋白质与还原糖模式，而蛋白质水解物与还原糖体系研究较少。与蛋白质相比，蛋白水解物肽类反应过程中可以增加与还原糖的接触时间，经美拉德修饰后可以提高功能性质，并能形成特殊的风味物质。为进一步提高明胶的利用价值，拓展明胶应用领域，该研究以猪皮明胶为原料，酶解成明胶肽，制备美拉德肽产物。

Lusani Norah Vhangani制得核糖-赖氨酸和果糖赖氨酸两种美拉德产物，由于参与反应的多糖不同表现出了不同的抗氧化性。杂多糖发生美拉德反应的研究则相对较少。樊素芳用红枣多糖与氨基酸发生美拉德反应制备出了具有芝麻酱香味的香料物质。由此可见参与美拉德反应的原料不同，反应产物所表现出的理化性质也会发生改变。

海藻是海洋生物资源的重要组成部分，估计15000余种，主要分为蓝藻、绿藻、红藻和褐藻。我国海藻资源丰富，产量居于世界前列。裂片石莼(Ulva fasciata)属于绿藻门、绿藻纲、石莼目、石莼科、石莼属，富含糖、蛋白质、脂肪、氨基酸、粗纤维、无机盐等成分。裂片石莼中含有较多的水溶性硫酸多糖，在我国海藻类中石莼是重要的大型经济藻类，在沿海均有分布，市场上价格便宜。但目前主要应用于饲料、有机肥料方面，产品附加值低，造成资源的严重浪费。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法，该美拉德反应产物具有良好的抗氧化活性。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以洗净的裂片石莼为原料，利用超声波辅助水提醇沉工艺获得裂片石莼粗多糖；将裂片石莼粗多糖加水配制水溶液，离心去除颗粒性不溶物后取上清液过0.45μm微孔滤膜，依次采用10kDa、100kDa的超滤膜进行超滤分离，并分别将截留液和透过液减压浓缩和冷冻干燥，得到10kDa＜分子量＜100kDa的初步分离纯化多糖；

(2)用复合酶酶解初步分离纯化多糖，然后选择孔径大小为500kDa规格的透析袋，对酶解反应液流水透析，透析液经浓缩、冷冻干燥得到酶解产物；所述复合酶是果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按照质量比1:1：0.4混合得到；

(3)将酶解产物配成水溶液并用0.45μm微滤膜过滤，所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析系统进行离子柱层析，分别以蒸馏水、0.1～0.4mol/L NaCl水溶液进行洗脱，选定最大洗脱峰对应的洗脱液，浓缩、用0.45μm微滤膜过滤得到滤液；所得滤液用Sephadex G-25凝胶层析系统进行凝胶柱层析，以蒸馏水进行洗脱，以硝酸银指示剂检测洗脱液中是否脱盐完全并收集不含盐的多糖部分，浓缩，冷冻干燥得到多糖酶解物；

(4)用碱性蛋白酶酶解明胶，将酶解液浓缩、冷冻干燥，制得明胶肽；

(5)步骤(3)制得的多糖酶解物和步骤(4)制得的明胶肽在蒸馏水中于pH 6.5-7.2、70-100℃条件下进行美拉德反应，反应0.5-3小时后得到美拉德反应产物。