[发明专利]一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法

权利要求书

1.一种裂片石莼多糖与明胶肽美拉德反应产物的制备方法，包括如下步骤：

(1)以洗净的裂片石莼为原料，利用超声波辅助水提醇沉工艺获得裂片石莼粗多糖；将裂片石莼粗多糖加水配制水溶液，离心去除颗粒性不溶物后取上清液过0.45μm微孔滤膜，依次采用10kDa、100kDa的超滤膜进行超滤分离，并分别将截留液和透过液减压浓缩和冷冻干燥，得到10kDa＜分子量＜100kDa的初步分离纯化多糖；

(2)用复合酶酶解初步分离纯化多糖，然后选择孔径大小为500kDa规格的透析袋，对酶解反应液流水透析，透析液经浓缩、冷冻干燥得到酶解产物；所述复合酶是果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶按照质量比1:1：0.4混合得到；

(3)将酶解产物配成水溶液并用0.45μm微滤膜过滤，所得滤液用DEAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析系统进行离子柱层析，分别以蒸馏水、0.1～0.4mol/L NaCl水溶液进行洗脱，选定最大洗脱峰对应的洗脱液，浓缩、用0.45μm微滤膜过滤得到滤液；所得滤液用Sephadex G-25凝胶层析系统进行凝胶柱层析，以蒸馏水进行洗脱，以硝酸银指示剂检测洗脱液中是否脱盐完全并收集不含盐的多糖部分，浓缩，冷冻干燥得到多糖酶解物；

(4)用碱性蛋白酶酶解明胶，将酶解液浓缩、冷冻干燥，制得明胶肽；

(5)步骤(3)制得的多糖酶解物和步骤(4)制得的明胶肽在蒸馏水中于pH 6.5-7.2、70-100℃条件下进行美拉德反应，反应0.5-3小时后得到美拉德反应产物。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，复合酶的加入量为初步分离纯化多糖质量的7.5～8.0％，酶解反应在pH 4.30～4.60、温度55℃条件下进行，反应时间4～6h。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，复合酶的加入量为初步分离纯化多糖质量的7.7％，酶解反应在pH 4.50、温度55℃条件下进行，反应时间5h。

4.如权利要求1～3之一所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，碱性蛋白酶的加入量为明胶质量的6.5～7.2％，酶解反应在pH 7.8～8.2、温度56℃条件下进行，反应时间4～6h。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)中，碱性蛋白酶的加入量为明胶质量的7％，酶解反应在pH 8.0、温度56℃条件下进行，反应时间5h。

6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，多糖酶解物和明胶肽的投料质量比为1：1-1：1.4。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤(5)中，多糖酶解物和明胶肽的投料质量比为1：1。