[发明专利]一种从菠菜中提取铁蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，将采集来的新鲜菠菜进行表面杀菌，经榨汁、酶解后通过蛋白质沉淀、离心分离再通过溶解、透析得到最终产物。本发明制得的铁蛋白成品的含铁量可达31.6mg/kg，因此本发明能充分把菠菜中的铁提取出来，解决了贫血病人“补铁”难的问题。

技术领域

本发明涉及生物提取技术，具体是一种从菠菜中提取铁蛋白的方法。

背景技术

铁是几乎所有生物体所必须的元素。铁含量在地壳中居第四位，但在生物体中的含量则很低，这与三价铁离子易形成难溶的化合物导致生物对铁的吸收利用程度降低有关。铁蛋白是一种铁结合和储存蛋白，广泛存在于动物、植物和微生物体内，是生物体内的一种保守性较高的多功能亚基蛋白。

菠菜又叫波斯菜，赤根菜，属于耐寒性绿叶类蔬菜，是我国早春淡季供应的主要蔬菜之一。菠菜有“营养模范菜”之称，它富含类胡萝卜素、维生素C、铁、钙、镁等多种营养素。因此，人们又称菠菜为“补铁菜”，医生对贫血病人总是提醒多吃菠菜用以补铁。但因菠菜中含铁元素的量很小，吃菠菜达不到真正补铁的目的，如果说吃菠菜达到补铁的目的，那么，一个人一次需要吃100斤或更多才能达到补铁的量，因此，通过吃菠菜补铁的作用微乎其微。本发明采用生物提取技术将菠菜中的铁元素提取出来，解决了人们食用菠菜补铁的不方便，同时提取的铁元素易于吸收。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，将采集来的新鲜菠菜进行表面杀菌，经榨汁、酶解后通过蛋白质沉淀、离心分离再通过溶解、透析得到最终产物。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，包括以下步骤：

（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次以保证无酒精溶液残留；

（2）为了减少微生物的污染，将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于45-55℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为25-35min；

（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧，真空脱气后能够有效防止溶液中的活性物质和营养成分被溶液中溶解的氧所氧化；

（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；

（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；

（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液；

（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；

（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度140-160℃，出口温度65-75℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。