[发明专利]一种从菠菜中提取铁蛋白的方法

权利要求书

1.一种从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）先将采集来的菠菜去除黄叶及虫咬部分，用清水冲洗干净后，放入含70%-75%的酒精溶液中浸泡，然后在筛网上沥干酒精溶液，放入无菌水中洗去酒精药液，在筛网上沥干，再用无菌水重复洗一次；

（2）将杀菌清洗后的菠菜立即送入无菌工作室内进行后续处理，先用切草机将菠菜切成1-2cm的小段，然后放入榨汁机中进行榨汁，榨汁后加入纤维素酶和果胶酶，混合均匀，置于45-55℃环境温度下进行酶促反应，反应过程中保持温度不变，持续时间为25-35min；

（3）将经过酶促反应的溶液用灭菌的塑料容器收集，利用真空过滤机对其进行真空脱气过滤，以脱去溶液中溶解的氧；

（4）将经过真空过滤后的溶液倒入容器中，在75℃恒温水浴环境中加热时间持续15min，并注意缓慢匀速搅拌使溶液受热均匀，使不耐热的杂蛋白变性沉淀，保持溶液处于静置状态4℃环境中冷却过夜；

（5）用离心管取经过冷却过夜的溶液在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃沉淀，用广口容器取上清液；以35g硫酸胺/100ml液体的比例缓慢地向上清液中加入硫酸胺粉末，同时缓慢搅拌，沉淀蛋白质，保持溶液处于静置状态置4℃环境中再冷却过夜；

（6）取经过再次冷却过夜后的溶液置于离心管中，然后在高速冷冻离心机中以15000g的离心力离心30min，弃上清，取黄色沉淀于大烧杯中，加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液溶解，边加入边搅拌直至沉淀完全溶解后，停止加入0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液；

（7）将经过溶解沉淀后的的溶液移至透析袋中，保持4℃环境温度不变；将溶液在0.025mol/L的Tris-HCL缓冲液中透析，并多次更换缓冲液以除去盐类，得到黄色的铁蛋白溶液；

（8）将透析后的溶液用小型真空减压浓缩器进行浓缩处理，将经浓缩后的铁蛋白溶液在空气压力0.3MPa，进口温度140-160℃，出口温度65-75℃工艺条件下用离心喷雾干燥机进行喷雾干燥，即得粉末状米黄色铁蛋白成品。

2.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，酶促反应的温度为50℃，持续时间为30min。

3.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（6）和步骤（7）中，Tris-HCL缓冲液的pH=7.25。

4.根据权利要求1所述的从菠菜中提取铁蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（8）中，喷雾干燥的进口温度为150℃，出口温度为70℃。