[发明专利]六瓣红大蒜酶解产物HPLC指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种六瓣红大蒜酶解产物HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）大蒜酶解产物待测溶液的制备：称取六瓣红大蒜鳞茎20g破碎、研磨，加25-30ml蒸馏水，50-55℃温浴酶解1h，加甲醇定容至50ml，5000×g离心15min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤；

（2）大蒜酶解产物供试品溶液的制备：C18固相萃取小柱经5ml甲醇、10ml超纯水活化，平衡15min；待测溶液以4ml/min速度过柱，再用5ml超纯水淋洗，低真空抽干；再由5ml甲醇洗脱后，室温下低流速氮气浓缩至0.5-0.8ml，再以甲醇定容至1ml，经0.45μm微孔滤膜过滤待测；

（3）参照物溶液的制备：精密称取二烯丙基二硫醚30.44mg和二烯丙基三硫醚32.12mg，溶于甲醇中定容至50ml，再吸取上述混合溶液1ml用甲醇定容至10ml，作为参照物；

（4）高效液相色谱分析：色谱柱为：EclipsePlusC18，5μm，4.6x250mm；保护柱为：EclipsePlusC18Grd，5μm，4.6x12.5mm；柱温35℃；流动相为甲醇和0.2%甲酸水溶液；采用梯度淋洗方式0→2min→10min→20min，甲醇：70%→70%→80%→80%；二极管阵列检测器检测波长240nm；进样量50μL；在上述条件下分析供试品溶液，得到大蒜酶解产物HPLC指纹图谱；

（5）重复上述（1）至（4），对10批次六瓣红大蒜酶解产物建立HPLC指纹图谱，通过比较分析确定了14个共有特征峰，其保留时间分别为：2.243min、2.991min、3.423min、3.871min、4.731min、5.993min、6.629min、7.168min、8.151min、9.295min、10.824min、13.344min、15.65min、18.723min，相对标准偏差（RSD）<2%，这些共有特征峰构成了六瓣红大蒜酶解产物HPLC标准指纹图谱。

2.一种六瓣红大蒜品种鉴别和生产质量控制方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）大蒜酶解产物待测溶液的制备：称取待测大蒜鳞茎20g破碎、研磨，加25-30ml蒸馏水，50-55℃温浴酶解1h，加甲醇定容至50ml，5000×g离心15min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤；

（2）大蒜酶解产物供试品溶液的制备：C18固相萃取小柱经5ml甲醇、10ml超纯水活化；待测溶液以4ml/min速度过柱，再用5ml超纯水淋洗，低真空抽干；5ml甲醇洗脱后室温下低流速氮气浓缩至0.5-0.8ml，再以甲醇定容至1ml，经0.45μm微孔滤膜过滤待测；

（3）参照物溶液的制备：称取二烯丙基二硫醚30.44mg和二烯丙基三硫醚32.12mg，溶于甲醇中定容至50ml，再吸取上述混合溶液1ml用甲醇定容至10ml，作为参照物；

（4）高效液相色谱分析：色谱柱为：EclipsePlusC18，5μm，4.6x250mm；保护柱为：EclipsePlusC18Grd，5μm，4.6x12.5mm；柱温35℃；流动相为甲醇和0.2%甲酸水溶液；采用梯度淋洗方式0→2min→10min→20min，甲醇：70%→70%→80%→80%；二极管阵列检测器检测波长240nm；进样量50μL；在上述条件下分析供试品溶液，得到大蒜酶解产物HPLC色谱图；

（5）将步骤（4），得到的大蒜HPLC色谱图与“六瓣红”大蒜酶解产物HPLC标准指纹图谱进行对比，通过对其所含化学成分差异的分析鉴别大蒜品种、产地或品质质量。