[发明专利]从万寿菊中提取6‑羟基山萘酚单体化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从万寿菊中提取6-羟基山萘酚单体化合物的方法。

背景技术

万寿菊，又名金菊花，学名Tagetes erecta，菊科万寿菊属，为一年生草本植物，除具有观赏价值外，还具有很好的药用价值，如其根具有解毒消肿作用，用于治疗上呼吸道感染、百日咳、支气管炎、口腔炎、乳腺炎等，其叶用于痈、疮、疖、疔，无名肿毒，其花平肝解热、祛风化痰，用于治疗头晕目眩、头风眼痛、小儿惊风、感冒咳嗽、乳痛等症。但是目前的万寿菊制剂成分一般为混合物，如将整朵万寿菊花风干后入药，缺乏必要的药效物质基础和药效研究，所以其缺乏合理的质量控制标准，难以确保临床用药的有效性、安全性、可持续性。可见，对万寿菊的化学成分进行进一步提取和研究非常有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有问题，采用二维高效液相色谱的方法，首次从万寿菊中分离纯化出6-羟基山萘酚，且纯度高达98％以上，为万寿菊及其制剂的质量控制与临床合理用药提供了更为精准的指导依据。

本发明所采用的技术方案为：

一种从万寿菊中提取6-羟基山萘酚单体化合物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)以万寿菊干花为原料，干燥后磨成粉末状得到万寿菊粗粉，用乙醇浸泡或者回流提取，然后过滤，取滤液重复1-3次，最终所得滤液进行旋转蒸发至干得粗提物，粗提物再溶于甲醇-水二元混合溶剂中，进行减压抽滤，得到粗提物浓度为50-500mg/mL的提取液；

(2)对提取液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为反相色谱柱DAISO C₁₈，采用的流动相为A相水、B相甲醇的二元流动相，进样量为100-1000μL/针，连续进样，流动相流速为6-16mL/min，洗脱方式为B相浓度50-55％(即按体积百分比B相50-55％、A相45-50％混合而成的液体，下同理)等度洗脱20min，检测器为紫外检测器、检测波长200-260nm，根据紫外吸收光谱收集13-18分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到一维液相组分；

(3)使用甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50-100mg/mL；

(4)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为Acchrom X-Amide色谱柱，采用的流动相为A相水、B相乙腈的二元流动相，进样量为10-500μL/针，连续进样，流动相流速为2-4mL/min，洗脱方式为B相浓度80-90％等度洗脱20min，检测器为紫外检测器、检测波长200-260nm，根据紫外吸收光谱收集8-10分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目的产物6-羟基山萘酚。

作为优选，所述步骤(1)、(3)中甲醇-水二元混合溶剂中甲醇体积分数为90-99％，进一步优选为95％。

作为优选，所述步骤(2)中色谱柱的尺寸为直径20mm、长度250mm，其中填料粒径为8μm，使用时柱温为室温或25-40℃，进一步优选为30℃。

作为优选，所述步骤(2)中等度洗脱方式为B相浓度53％等度洗脱20min。

作为优选，所述步骤(4)中色谱柱的尺寸为直径10mm、长度250mm，其中填料粒径为8μm，使用时柱温为室温或25-40℃，进一步优选为30℃。

作为优选，所述步骤(4)中洗脱方式为B相浓度85％等度洗脱20min。

由于本发明原料万寿菊中的物质极性比较集中，所以我们选用二维高效液相色谱进行有效组分的提取。

在一维分离的条件选择上：首先，所分的样品量较大，所以挑选甲醇-水作为流动相进行分离，既成本较低，又毒性较小，适合大规模生产所用；其次，在该样品中所含的6-羟基山萘酚含量较大，C18柱可以对其进行分离，并结合甲醇-水流动相，可以在等度的条件下就完成样品的一维分离，并得到较高的纯度，且柱残留较少；最后，通过对样品进行梯度洗脱试验，我们发现样品中所含的物质极性较为相近，出峰时间集中，而采用本发明等度洗脱的方式可以很好地完成初步分离，经过条件摸索发现53％甲醇-47％水是最佳的洗脱条件，可以一维分离收集到最高纯度的6-羟基山萘酚，且与其他峰之间分离非常好，无交叉或重叠等现象，非常有利于分离操作和后续进一步提纯，并且等度洗脱的方式利于开展连续多次上样，既减少了色谱柱出峰的死时间，又节约了冲柱及平衡时间，可以在更短的时间内完成6-羟基山萘酚的粗分离，适合于扩大到工业生产。