[发明专利]一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法

权利要求书

1.一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于包括：往蛋白质溶液中加入碱 后冷却，在0～10℃下，往冷却后的蛋白质溶液中加入烯酰氯乙腈溶液进行反应，纯化反 应结束后的混合液得到烯酰化蛋白质。

2.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于所述蛋白质溶 液中的蛋白质选自溶菌酶蛋白、牛血清白蛋白；所述蛋白质溶液的浓度为1～10000μmol/L。

3.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于所述碱为碳酸 盐或叔胺。

4.如权利要求3所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于所述碳酸盐 选自碳酸钠、碳酸钾中的至少一种；所述叔胺选自三乙基胺、三甲基胺、N,N-二甲基甲 酰胺中的至少一种；所述碱在混合液中的浓度为10～100mmol/L。

5.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于所述烯酰氯 为丙烯酰氯、甲基丙烯酰氯；所述烯酰氯与蛋白质的物质的量比为1～100。

6.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于所述往冷却 后的蛋白质溶液中加入烯酰氯乙腈溶液，加入之前先将烯酰氯乙腈溶液冷却至0～10℃。

7.如权利要求1～6任一所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于反应 结束后将混合液转移至截留分子量为5K的超滤离心管中，离心，弃去滤液；再超滤离心 管中加入超纯水，离心，弃去滤液，所得产物即为烯酰化蛋白质。

8.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于包括：将 0.716g溶菌酶蛋白溶解于10mL水中，往溶菌酶蛋白溶液中加入53mg碳酸钠固体使得其最 终浓度为50mmol/L，混匀后置于4℃冰箱中冷藏；取45.2mg的丙烯酰氯，用5倍丙烯酰 氯体积量的乙腈稀释配制成丙烯酰氯溶液；将蛋白溶液置于冰水浴中，边振荡边往溶菌 酶蛋白溶液中逐滴加入丙烯酰氯乙腈溶液进行反应，反应10min后取出混合液；将混合 液转移至截留分子量为5K的超滤离心管中，离心，弃去滤液；再超滤离心管中加入超纯 水，离心，弃去滤液，得到丙烯酰化溶菌酶蛋白。

9.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于其包括：将 0.716g溶菌酶蛋白10mL水中，，往溶菌酶蛋白溶液中加入10.1mg三乙基胺溶液使得其 最终浓度为10mmol/L，混匀后置于4℃冰箱中冷藏；取41.8mg的甲基丙烯酰氯，用10 倍甲基丙烯酰氯体积量的乙腈稀释配制成甲基丙烯酰氯溶液；将溶菌酶蛋白溶液置于冰 水浴中，边振荡边往蛋白溶液中逐滴加入甲基丙烯酰氯乙腈溶液，反应5min后取出混合 液；将混合液转移至截留分子量为5K的超滤离心管中，离心，弃去滤液；再超滤离心管 中加入超纯水，离心，弃去滤液，得到甲基丙烯酰化溶菌酶蛋白。

10.如权利要求1所述一种在蛋白质上修饰烯酰基团的方法，其特征在于其包括： 将1.33g牛血清白蛋白溶于10mL水中，往牛血清白蛋白溶液中加入101mg三乙基胺溶 液使得其最终浓度为100mmol/L，混匀后置于4℃冰箱中冷藏；取36.2mg的丙烯酰氯， 用10倍体积量的乙腈稀释配制成丙烯酰氯溶液；将牛血清白蛋白溶液置于冰水浴中，边 振荡边往溶液中逐滴加入4倍量的丙烯酰氯乙腈溶液，反应15min后取出混合液；将混 合液转移至截留分子量为10K的超滤离心管中，离心，弃去滤液；再超滤离心管中加入 超纯水，离心，弃去滤液，得到丙烯酰化牛血清白蛋白。