[发明专利]一种定性、定量一体化检测乳品掺次的方法

权利要求书

1.一种定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

A、对纯乳品和待测样品进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳，比对所述待测样品与所述纯乳品电泳指纹图谱是否相同、密度是否一致；选出电泳指纹图谱中待测样品区别于所述纯乳品的差异条带，并将所述差异条带切割、酶解；

B、对所述酶解后的样品进行液相色谱质谱联用分析实验，将所述分析结果中相对丰度高的蛋白质与现有数据库中蛋白进行比对，确定所述待测样品中掺次蛋白的种类；

C、分别以所述纯乳品和所述掺次蛋白的纯品为标准品，进行移动反应界面电泳滴定，利用移动反应界面阻滞信号R_MRB与蛋白浓度存在的线性关系建立两条标准曲线，获得所述纯乳品的标准曲线斜率α₁、所述掺次蛋白纯品的标准曲线斜率α₂以及截距b；

D、采用与步骤C条件相同的移动反应界面电泳滴定法，对所述待测样品进行移动反应界面电泳滴定，获得阻滞信号R_mix，并检测其蛋白浓度C_mix；

E、将所述阻滞信号R_mix、蛋白含量C_mix带入方程式获得待测样品中所述掺次蛋白质和乳品蛋白的浓度比值；

其中，C_pro，1为待测样品中乳品的蛋白质浓度，C_pro，2为待测样品中掺次蛋白的浓度。

2.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤A中，所述十二烷基硫酸钠聚丙烯酰氨凝胶电泳的浓度T值为10～14％，样品浓缩时施加的电压为75～90V，样品分离时施加的电压为110～130V。

3.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤A中，所述酶解所采用的是胰蛋白酶且为序列级别。

4.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤B中，所述液相色谱质谱联用分析实验，采用纳升级高效液相色谱液相系统Dionexuitimate3000进行分离。

5.根据权利要求1或4所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤B中，所述的液相色谱质谱联用分析实验，采用的流动相A为99.9％水和0.1％甲酸，流动相B为99.9％乙腈和0.1％甲酸，上样缓冲液为2％乙腈、97.9％水及0.1％甲酸，其中，百分比具体指体积百分比。

6.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤B中，所述现有数据库包括NCBI。

7.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤B中，所述掺次蛋白选自乳制品或非乳制品蛋白食品。

8.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤C、D中，所述移动反应界面电泳滴定中采用的凝胶为聚丙烯酰胺凝胶，重量体积浓度为10.0～20.0％，交联度为2.0～8.0％；所述移动反应界面电泳滴定中施加的电场为2～8V/mm；所述移动反应界面电泳滴定为酸式移动反应界面电泳滴定或碱式移动反应界面电泳滴定。

9.根据权利要求1或8所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，所述移动反应界面电泳滴定中，阳极液是离子强度20～200mmol/L的盐酸与氯化钠或者氯化钾的混合溶液，阴极液为离子强度20～200mmol/L的氯化钠或者氯化钾溶液，背景电解质溶液为离子强度20～200mmol/L的氯化钠或者氯化钾溶液。

10.根据权利要求1所述的定性、定量一体化检测乳品掺次的方法，其特征在于，步骤D中，所述蛋白浓度C_mix是通过凯氏定氮法或BCA法测得的。