[发明专利]一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C‑反应蛋白的检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫诊断领域，具体涉及一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

C-反应蛋白（C-reactive protein，简称为CRP）是由 Tillet 和 Francis 在 1930 首先发现，因其能与肺炎链球菌细胞壁的 C 多糖起沉淀反应而命名。CRP 作为一种急性时相反应蛋白，是在白介素-6的介导下主要由肝脏产生，同时受白介素-1、肿瘤坏死因子α等的调节和刺激，在动脉粥样硬变处、肾脏、神经元及空泡巨噬细胞中也有CRP合成。在动物体内，也同样存在着CRP，如在狗、猪、兔、鲎、河蚌等中均发现过，狗的CRP是一种环状正五聚蛋白，分子量约为100kD，由5个亚单位组成，每个亚单位的分子量为20 kD，其中的2个亚单位是糖基化的。CRP无论在人或动物体内均是急性时相反应蛋白中重要的蛋白之一，是一种敏感的炎症标志物，在急性创伤和感染时其血浓度急剧升高。正常动物血清CRP含量很低，但在感染、炎性、手术及肿瘤等情况下，几个小时迅速升高，在狗体内24~48小时可达高峰。病变消退后，CRP可迅速下降至正常。在我国，兽用抗生素在兽医临床和动物饲养方面应用广泛、不可或缺，为了达到既能促进生长又能防病治病的目的，大量的种类繁多的抗生素被应用与畜禽生产的许多环节。而CRP一般在病毒感染时不增高或增高不明显，在细菌感染后会迅速增高，所以可作为动物细菌和病毒感染的一个首选指标，防止抗生素滥用和减少食品带来的健康问题。

1977年Sternberg创建了速率散射比浊法，是以测定的溶液对光的散射程度来判断样品中抗原的含量。一定波长的光沿水平轴照射，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射，散射强度与抗原抗体免疫复合物的含量成正比。但免疫比浊法由于检测灵敏度达不到临床的要求，于是出现了胶乳增强免疫比浊法。其基本原理是首先将抗体吸附在一种胶乳颗粒上，当遇到相应的抗原时，抗原抗体结合而出现胶乳凝集。单个胶乳颗粒的大小在入射光波长之内，光线可透过。当两个以上胶乳颗粒凝集可阻碍光线透过，使透射光减少，其减少程度与胶乳凝集的程度成正比，亦与抗原成反比。但目前市面上暂未出现用于胶乳增强免疫比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂。

发明内容

本发明针对上述技术问题，提出了一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法。具体，本发明的技术方案为：

一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；

所述R1试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0.2%~2.5%w/v的促凝剂、0.1~2%w/v表面活性剂、0.01%~0.1%w/v的第一防腐剂；

所述的R2试剂的组分包括：0.5%~2%w/v标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳、0.2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0.01~0.1%w/v的第二防腐剂。

一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测方法，包括以下步骤：

S1、将校准品放置于本发明提供的检测试剂盒中，测量分析后得到浓度-吸光度差值校准曲线；

S2、取出校准品，放入待测品，根据步骤S1得到的浓度-吸光度差值校准曲线计算得到所述待测品中的C-反应蛋白的浓度。

本发明提供的基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒，首先填补了目前市面上用于胶乳增强免疫比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂的空白，弥补现在国内兽医临床检测的不足。其次，采用本发明提供的基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒及检测方法，结合均相免疫的透射比浊或散射比浊法进行试验，具有操作简单、反应快速、灵敏度高、特异性好的优点。

附图说明

图1是实施例1中的浓度-吸光度差值校准曲线。

图2是实施例2中的浓度-吸光度差值校准曲线。

具体实施方式

本发明提供了一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂；

所述R1试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0.2%~2.5%w/v的促凝剂、0.1~2%w/v表面活性剂、0.01%~0.1%w/v的第一防腐剂；

所述的R2试剂的组分包括：0.5%~2%w/v标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳、0.2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0.01~0.1%w/v的第二防腐剂。