[发明专利]一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C‑反应蛋白的检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种基于酰胺基团纳米胶乳增强比浊法动物C-反应蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂；

所述R1试剂的组分包括：10~50mmol/L的第一缓冲液、0.2%~2.5%w/v的促凝剂、0.1~2%w/v表面活性剂、0.01%~0.1%w/v的第一防腐剂；

所述的R2试剂的组分包括：0.5%~2%w/v标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳、0.2~2%w/v的稳定剂、10~50mmol/L的第二缓冲液、0.01~0.1%w/v的第二防腐剂，其中所述纳米胶乳通过表面的酰胺基与C-反应蛋白抗体的氨基或羧基共价结合。

2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，制备所述R2试剂中的标记C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳的方法包括如下步骤：将含有酰胺基团的胶乳加入活化缓冲液中，再加入活化交联剂进行活化，然后加入C-反应蛋白多克隆抗体进行交联，最后加入胶乳封闭液，封闭残留活化位点。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述活化缓冲液为1~10mmol/L、pH=4~6的2-吗啉乙磺酸缓冲液；

所述活化交联剂中含有1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N羟基琥珀酰胺，且所述活化交联剂中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐的浓度为0.01~0.1%w/v，所述N羟基琥珀酰胺的浓度为0.01~0.1%w/v；

所述胶乳封闭液中含有0.2~2%w/v的第二稳定剂、10~50mmol/L的第三缓冲液、0.01~0.1%w/v的第三防腐剂。

4.根据权利要求2或3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的活化时间为1~2小时；所述的交联反应时间为2~4小时。

5.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液各自独立地选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、甘氨酸、柠檬酸-磷酸盐缓冲液、tris缓冲液和HEPES缓冲液中的一种；且所述第一缓冲液、第二缓冲液和第三缓冲液的pH值各自独立地为6.5~8.0。

6.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述促凝剂为不同聚合度的聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮中的一种或两种；

所述表面活性剂为阳离子型表面活性剂、阴离子型表面活性剂或非离子型表面活性剂中的一种或多种，且所述表面活性剂的亲水亲油平衡值大于8.0；所述第一防腐剂、第二防腐剂和第三防腐剂各自独立地为叠氮钠、硫柳汞、Proclin-300中的一种或多种。

7.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂、第二稳定剂各自独立地为蛋白质、糖或无机盐中的一种或多种；其中，所述蛋白质为BSA、NBS、Tripton、Casein或明胶中的一种或多种；所述糖为蔗糖、海藻糖或甘露糖中的一种或多种；所述无机盐为氯化钠、氯化钾的一种或两种。

8.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中的C-反应蛋白抗体交联酰胺基团纳米胶乳的颗粒直径在40~300nm之间。