[发明专利]一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法。

背景技术

绿竹（BambusaoldhamiiMcClure）属于禾本科竹亚科箣竹属，为优良的笋材两用竹种。笋期5-11月，较长的笋期和较大的产量使其具有很高的经济效益。另外，其竹材纤维长，劈篾性好，是造纸建筑的好材料。然而传统的母竹移栽、埋鞭、扦插等方法，效率低，成本高。这一直都限制了优良竹种的大规模推广。因此，采用合适的外植体，利用植物组织培养的技术来建立优良竹种的离体快速繁殖和再生体系一直是科学研究的方向。

竹类植物的组织培养起步于1968年，到现在已经先后对20余属80多个竹种开展了组培研究，而且应用于生产实践中。迄今为止，建立竹子再生体系所用的外植体大多是种胚、花药、花序、笋、芽、茎段、叶鞘等，关于花芽再生的报道极少，有关对绿竹通过花芽再生途径来实现植株的再生的研究未见有报道。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明利用绿竹的无菌花芽为外植体，经过愈伤组织诱导、增殖、分化、试管苗生根，移栽，建立其再生体系的方法。

本发明通过以下技术方案加以实现：

所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于按下列步骤进行：

1）无菌花芽的获得

选取健壮、生长力旺盛、无病斑的绿竹植株，切下侧芽，经消毒处理后，在解剖显微镜下切下无菌芽尖为外植体，将芽尖接种在增殖培养基中，基本培养基为MS(MurashigeandSkoog)，添加的外源激素为6-BA即6-苄基腺嘌呤，浓度为1mg·L^-1；培养条件：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃，随着继代次数增加，竹子出现试管开花，取开花植株的花芽作为外植体，无菌花芽在原培养基中继代培养；

2）愈伤组织诱导培养

诱导愈伤组织所用的花芽选用步骤1）已经建立好的无菌花芽体系，将0.05-0.1cm长的花芽接种于诱导培养基中：愈伤组织诱导基本培养基为MS培养基，添加的外源激素为2,4-D即2,4-二氯苯氧乙酸，2,4-D浓度为2mg·L^-1，并在诱导培养基中添加500mg·L^-1的水解酪蛋白、500mg·L^-1的脯氨酸和500mg·L^-1的谷氨酰胺；pH为5.7；诱导条件为：暗培养，温度25±2℃；

3）愈伤组织增殖培养

一个月后，将诱导出的致密愈伤组织转移到新的培养基中增殖培养，愈伤组织增殖培养基同诱导培养基，pH为5.7；培养条件为：暗培养，温度25±2℃；

4）分化培养

将经过增殖培养的致密愈伤组织接种在分化培养中进行分化，分化培养基同诱导培养基，pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

5）生根培养

将从分化培养基分化出的再生植株长到3-5cm时移入生根培养基中进行生根；生根培养基为MS培养基，pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

6）再生植株的移栽

一个月后，选取根长势粗壮的再生苗进行驯化移栽，将其放在驯化室20000lux强光下炼苗一周，然后取出试管苗，用30-40℃温水洗净根部的培养基，将植株移栽于混合培养基质中，并进行单株套袋，定期浇水，一周后剪去塑料袋两角，两周后完全脱袋，当植株长出新叶，生长稳定时移栽至温室。

所述的是一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤1）中消毒处理是指用清洗剂清洗干净，用体积分数为0.005的次氯酸钠溶液浸泡10min，次氯酸钠溶液中添加有吐温-20，吐温-20的添加量为每50ml次氯酸钠溶液中添加一滴，然后用无菌水冲洗4-5次。

所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤1）中无菌芽尖的长度为5-10mm。

所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤6）中温水的温度为30-40℃，混合培养基质由泥炭：珍珠岩：蛭石=1:1:1混合而成。