[发明专利]一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法

权利要求书

1.一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于按下列步骤进行：

1）无菌花芽的获得

选取健壮、生长力旺盛、无病斑的绿竹植株，切下侧芽，经消毒处理后，在解剖显微镜下切下无菌芽尖为外植体，将芽尖接种在增殖培养基中，基本培养基为MS，添加的外源激素为6-BA即6-苄基腺嘌呤，浓度为1mg·L^-1；培养条件：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃，随着继代次数增加，竹子出现试管开花，取开花植株的花芽作为外植体，无菌花芽在原培养基中继代培养；

2）愈伤组织诱导培养

诱导愈伤组织所用的花芽选用步骤1）已经建立好的无菌花芽体系，将0.05-0.1cm长的花芽接种于诱导培养基中：愈伤组织诱导基本培养基为MS培养基，添加的外源激素为2,4-D即2,4-二氯苯氧乙酸，2,4-D浓度为2mg·L^-1，并在诱导培养基中添加500mg·L^-1的水解酪蛋白、500mg·L^-1的脯氨酸和500mg·L^-1的谷氨酰胺；pH为5.7；诱导条件为：暗培养，温度25±2℃；

3）愈伤组织增殖培养

一个月后，将诱导出的致密愈伤组织转移到新的培养基中增殖培养，愈伤组织增殖培养基同诱导培养基，pH为5.7；培养条件为：暗培养，温度25±2℃；

4）分化培养

将经过增殖培养的致密愈伤组织接种在分化培养中进行分化，分化培养基同诱导培养基，pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

5）生根培养

将从分化培养基分化出的再生植株长到3-5cm时移入生根培养基中进行生根；生根培养基为MS培养基，pH为5.7；培养条件为：光培养，光强2400lux，光周期16/8h，温度25±2℃；

6）再生植株的移栽

一个月后，选取根长势粗壮的再生苗进行驯化移栽，将其放在驯化室20000lux强光下炼苗一周，然后取出试管苗，用30-40℃温水洗净根部的培养基，将植株移栽于混合培养基质中，并进行单株套袋，定期浇水，一周后剪去塑料袋两角，两周后完全脱袋，当植株长出新叶，生长稳定时移栽至温室。

2.根据权利要求1所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤1）中消毒处理是指用清洗剂清洗干净，用体积分数为0.005的次氯酸钠溶液浸泡10min，次氯酸钠溶液中添加有吐温-20，吐温-20的添加量为每50ml次氯酸钠溶液中添加一滴，然后用无菌水冲洗4-5次。

3.根据权利要求1所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤1）中无菌芽尖的长度为5-10mm。

4.根据权利要求1所述的一种利用绿竹花芽进行快速高效再生体系的建立方法，其特征在于步骤6）中温水的温度为30-40℃，混合培养基质由泥炭：珍珠岩：蛭石=1:1:1混合而成。