[发明专利]用于分型检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒及其生产方法与应用

说明书

本发明提供了一种用于分型检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒，其特征在于，包括具有如说明书表3所示的核苷酸序列和化学结构的clade1‑5型水痘带状疱疹病毒对应的特异性引物及特异性探针。该试剂盒具有检测各型水痘带状疱疹病毒DNA的功能，检测灵敏度为10²拷贝/反应，并且与人基因组、单纯疱疹病毒1型/2型、巨细胞病毒、EB病毒无交叉反应，适用于临床水痘带状疱疹病毒感染者的病毒基因诊断，还可用于不同Clade型别水痘带状疱疹病毒的流行病学调查。

技术领域

本发明属于微生物基因诊断技术领域，具体涉及一种用于分型检测水痘带状疱疹病毒的试剂盒及其生产方法与应用。

背景技术

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)是疱疹病毒科水痘病毒属的一种病毒，是临床水痘和带状疱疹共同的病原体。当患者初次感染VZV时会发生水痘症状，并产生伴随终身的潜伏感染，数年后机体免疫力下降时潜伏的病毒可能再次激活引起带状疱疹。水痘如不及时诊断治疗，将继发水痘性肺炎、脑炎、心肌炎等，甚至造成死亡，而带状疱疹会带给患者长时间的剧烈疼痛，给患者生活带来许多不便，给公共卫生支出带来负担。近年来水痘、带状疱疹发病率出现上升趋势，全球陆续均有重症水痘致死的病例报道，有文献报道国内外部分地区成人水痘发病率明显上升，而且在人员聚集区域容易造成爆发性流行。

回顾人们过往临床对VZV感染的诊断方法发现，目前临床医生主要依靠典型的临床症状和皮损来进行VZV感染诊断，但其他病毒(如柯萨奇病毒、单纯疱疹病毒)感染同样也会引起水痘样皮疹给鉴别诊断带来了困难。而现有的实验室诊断方法有病毒培养、直接荧光抗体分析、PCR、血清抗体检测，他们都存在需要样本量大、操作复杂、速度较慢、不能批量检测、不能多重检测、敏感性低等缺点，这些都困扰着临床诊治、预防。其中病毒培养是VZV感染诊断的金标准，但其需要特殊实验室条件，操作复杂，需要数天时间，且阳性率低；直接荧光抗体分析操作繁琐，需要专业有经验的技术人员，且一次只能检测一个标本，不能高通量检测；常规PCR检测不能进行批量、多重检测，分型需要进行多管检测，繁琐且耗时长；血清抗体检测是临床常用的病毒诊断方法，但VZV抗体不能作为其感染的诊断指标，因为其影响因素较多，且与预防接种状态有关。另外，随着人员流动频繁，各地VZV病毒野生毒株的新发及基因突变等流行病学 特点的变化也给VZV预防提出了新的考验，要求实验室快速对人群中流行的VZV病毒检测的同时，还能进行准确的分型，把握各型VZV流行趋势，但现有的实验室检测方法均不能进行分型检测。总之，研发新型的水痘带状疱疹病毒诊断试剂盒仍然是人们面对的挑战之一。

流式液相芯片技术又称流式荧光技术或悬浮阵列流式荧光技术，其原理是将荧光标记后的单细胞(或颗粒)悬液随鞘液进入流动室，压力迫使鞘液包裹的液滴包含单一细胞或颗粒垂直通过检测区。荧光标记的细胞或颗粒在激光激发下发出荧光，根据其本身标记的荧光和激发后发出的荧光综合分析进行检测。其在小样本、高通量、操作简便、快速准确、敏感度、特异度高等方面优于传统的分析方法，而且其所有反应均在液相中进行，保持天然构象，有利于探针和待测物充分反应，目前已广泛用于各类核酸及蛋白检测，如基因分型、抗原/抗体检测、感染性疾病诊断等，其中HPV检测及分型试剂盒、呼吸道病毒检测试剂盒、细胞因子检测试剂盒、肿瘤标志物检测试剂盒等已经在美国和中国经FDA及SFDA批准用于临床检测。VZV具有疱疹病毒中最保守的基因组，根据2008年国际会议将VZV分为5型(clade1-5)。保守的基因组有利于对其设计他异性的引物及探针，进行多重PCR及杂交。

发明内容

本发明的目的是提供一套基于流式液相芯片平台能快速、高通量、多重检测水痘带状疱疹病毒感染患者疱疹液水痘带状疱疹病毒DNA并对它进行Clade分型的微生物基因诊断试剂盒，适用于快速、高通量对临床水痘带状疱疹病毒感染者的诊断，还可用于不同Clade型别水痘带状疱疹病毒的流行病学调查。

本发明的技术方案如下：