[发明专利]一种检测辣椒黄脉病毒的RT-LAMP引物及试剂盒在审
| 申请号： | 201510526746.0 | 申请日： | 2015-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN105039600A | 公开（公告）日： | 2015-11-11 |
| 发明（设计）人： | 汤亚飞;何自福;佘小漫;蓝国兵 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘晖 |
| 地址： | 510640 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 辣椒 病毒 rt lamp 引物 试剂盒 | ||
1.一种检测辣椒黄脉病毒的RT-LAMP引物，其特征在于包括一对外侧引物F3和B3以及一对内侧引物FIP和BIP，其核苷酸序列如下所示：
F3:GATCACGTAACACCCGCC；
B3:GCTCTCTGATAGAGACGGCC；
FIP:GCCTCCATTTCGTCGTCTTCGA-GTTCGCCCTGTCGTTGTG；
BIP:TTGGAGGAAGGTCGAGCAACAG-AAGGTGACAGATCCTGAGGA。
2.一种辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于包含权利要求1所述的RT-LAMP引物。
3.根据权利要求2所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于：
所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，包含如下组分：权利要求1所述的RT-LAMP引物；RT-LAMP反应液；酶溶液；核酸荧光染料。
4.根据权利要求3所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于：
所述的RT-LAMP反应液包含如下组分：Tris-HCl40mM；KCl20mM；MgSO416mM；(NH4)2SO420mM；Tween200.2％w/w；Betaine1.6M；dNTPs每种2.8mM。
5.根据权利要求3所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于：
所述的酶溶液为BstDNA聚合酶和AMV逆转录酶的混合溶液。
6.根据权利要求3所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒，其特征在于：
所述的核酸荧光染料为荧光目视检测试剂。
7.一种检测辣椒黄脉病毒的方法，其特征在于包含如下步骤：
以待测样品的RNA为模板，利用权利要求1所述的RT-LAMP引物或权利要求2～6任一项所述的RT-LAMP检测试剂盒进行RT-LAMP扩增反应；反应结束后观察RT-LAMP扩增反应溶液颜色变化，若反应液显绿色，则判断为阳性反应；若反应液显橙色，则判断为阴性反应。
8.根据权利要求7所述的检测辣椒黄脉病毒的方法，其特征在于：
所述的RT-LAMP扩增反应的反应体系为25μL反应体系，包含如下组分：RT-LAMP反应液12.5μL，酶溶液1.0μL，40pmol/μL引物FIP1.0μL，40pmol/μL引物BIP1.0μL，10pmol/μL引物F30.5μL，10pmol/μL引物B30.5μL，核酸荧光染料1.0μL，RNA模板1.0μL，及去离子水6.5μL。
9.根据权利要求7所述的检测辣椒黄脉病毒的方法，其特征在于：
所述的RT-LAMP扩增反应的条件为：在65℃恒温条件下，扩增反应60min后，加热至80℃，反应5min。
10.权利要求1所述的检测辣椒黄脉病毒的RT-LAMP引物或权利要求2～6任一项所述的辣椒黄脉病毒RT-LAMP检测试剂盒在植物病毒检测领域中的应用。
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