[发明专利]小麦黄花叶病毒双抗夹心生物素-亲和素ELISA检测方法及应用

权利要求书

1.一种小麦黄花叶病毒双抗夹心生物素-亲和素ELISA检测方法，包括以下步骤：

1)每孔用100uL病毒特异性抗体包被酶标板，37℃放置2h后，4℃过夜放置，洗板，甩干；

2)每孔加入200uL含10％小牛血清的磷酸盐缓冲液，37℃孵育2h，洗板，甩干；

3)每孔分别加入100uL待检病毒样品、阳性和阴性样品，37℃孵育1h，洗板，甩干；

4)每孔加入100uL生物素标记的二抗，37℃孵育1h，洗板，甩干；

5)每孔加入100uL亲和素标记的酶，37℃孵育1h，洗板，甩干；

6)每孔加入100uL显色底物，37℃孵育5～15min进行显色反应，肉眼观察显色后每孔加入100uL终止液，用酶标仪测定OD值，以大于等于阴性对照OD值3倍的作物阳性结果的阈值。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述病毒特异性抗体为小麦黄花叶病毒纯化单抗2D4。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)中，用PH9.6的0.05mol/L的碳酸盐缓冲液将病毒特异性抗体稀释为5～10ug/mL浓度后包被酶标板。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)、2)、3)、4)和5)中洗板用的洗涤液为PH7.4含0.5mol/LTween-20的磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤4)所述生物素标记二抗为生物素标记的小麦黄花叶病毒纯化的单抗2D3，使用浓度为0.2ug/mL。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤5)所述亲和素标记的酶为辣根过氧化物酶。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤6)所述显色底物为四甲基联苯胺。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤6)所述终止液为2mol/L硫酸溶液。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤6)所述OD值在波长450nm下测定。