[发明专利]一种定量检测DNA双链断裂碎片数的标准品的制备方法及应用

权利要求书

1.一种定量检测精子DNA双链断裂碎片数的标准品的制备方法，其特征在于，用限制性内切酶PmeI, EcoRV, PsiI, SspI, HaeⅢ, AluI分别完全酶切已知序列的基因或基因组DNA所得碎片即为标准品；所述的标准品要满足以下条件：

用于制备标准品的对象为完整基因或基因组，即DNA双链断裂阴性标本，要求出现DNA双链断裂的比例＜5%；

能够利用所述的标准品采用标准曲线法对待测样品进行DNA双链断裂碎片数的定量分析，所述的标准品与待测样品的DNA类型相同。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用连接介导荧光定量PCR进行标准品扩增制备标准曲线。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，标准曲线以进行连接介导荧光定量PCR后的标准品的Ct值为横坐标，DNA双链断裂碎片数为纵坐标，通过曲线拟合获得拟合方程。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，对于任何已知DNA序列的基因或基因组进行序列扫描，计算出基因或基因组中限制性内切酶特异识别序列出现的次数，1个特异识别序列即为1个切割位点，从而计算限制性内切酶在基因或基因组中的切割位点数，得到标准品基因或基因组DNA双链断裂碎片数。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，待测样品同样采用连接介导荧光定量PCR法扩增，将待测样本的Ct值代入方程中即换算得到DNA双链断裂碎片数值。

6.权利要求2-5任一项所述的方法制备得到的标准品在制备定量检测精子DNA双链断裂片段数的制剂中的应用，其特征在于，所述的制剂用于对待测样品进行DNA双链断裂碎片数的定量分析。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，利用所述的标准品采用标准曲线法对待测样品进行DNA双链断裂碎片数的定量分析。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的标准品与待测样品的DNA类型相同。