[发明专利]食管癌中hsa-mir-612的检测引物组及试剂盒

权利要求书

1.食管癌中hsa-mir-612的检测引物组，其特征在于，包括hsa-mir-612基因特异性引物组、内参U6基因特异性引物组；

所述hsa-mir-612基因特异性引物组包括：

上游引物hsa-mir-612-F，如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列，

下游引物hsa-mir-612-R，如SEQIDNO:2所示的核苷酸序列；

所述内参U6基因特异性引物组包括：

上游引物U6-F，如SEQIDNO:3所示的核苷酸序列，

下游引物U6-R，如SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的检测hsa-mir-612的检测引物组，其特征在于，所述SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3和SEQIDNO:4具有至多5个核苷酸差异的序列。

3.如权利要求2所述的检测hsa-mir-612的检测引物组，其特征在于，对所述hsa-mir-612基因特异性引物组、内参U6基因特异性引物组进行硫化、甲基化、形成肽核酸、在核糖的2′位置引入甲基和/或氟取代基。

4.检测hsa-mir-612基因扩增的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任意一所述的检测hsa-mir-612基因扩增的引物组。

5.如权利要求4所述的检测hsa-mir-612基因扩增的试剂盒，其特征在于，还包括阴性质控品和阳性质控品，所述阴性质控品为H₂O，所述阳性质控品为体外合成的hsa-mir-612基因。

6.如权利要求4所述的检测hsa-mir-612基因扩增的试剂盒，其特征在于，还包括Premix，所述Premix包含DNA聚合酶、SYBRGreenI、dNTPs及PCR反应缓冲液。

7.如权利要求6所述的检测hsa-mir-612基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒分为阴性质控品、阳性质控品、hsa-mir-612反应体系、内参U6反应体系；

所述hsa-mir-612反应体系包括Premix10μL，浓度为10μM的hsa-mir-612-F0.5μL，浓度为10μM的hsa-mir-612-R0.5μL，最后用无菌超纯水将反应体系补至18.0μL；

所述内参U6反应体系包括Premix10μL，浓度为10μM的U6-F0.5μL，浓度为10μM的U6-R0.5μL，最后用无菌超纯水将反应体系补至18.0μL。

8.权利要求4-7任意一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)提取样本的核酸DNA；

2)取待检样本进行荧光定量PCR扩增反应；

3)根据扩增曲线Ct值，判断样品属性。

9.如权利要求8所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，步骤2)中荧光定量PCR扩增反应的程序为95℃，10min；95℃，15sec；60℃，1min。